白樺BpZFP3基因抗逆功能研究.pdf

1、鋅指蛋白是一類具有手指狀結構域的轉錄因子，因其具有指狀結構特征且能結合Zn2+而得名。鋅指蛋白是個龐大的家族，根據(jù)Cys和His殘基的數(shù)目和位置可將鋅指轉錄因子分為C2H2、C8、C6、C3HC4、C2HC、C2HC5、C4、CCCH和C4HC3九種類型，其中C2H2型是生物中發(fā)現(xiàn)的種類最多的一類鋅指蛋白。研究表明，植物體中的鋅指蛋白在植物生長發(fā)育和耐逆性等多種生物學過程中發(fā)揮作用。本研究以白樺的鋅指蛋白轉錄因子基因為研究對象，對基因的

2、表達和功能進行了初步研究，主要研究結論如下:
　　(1)利用qRT-PCR技術，對不同脅迫條件下14個BpZFPs基因在白樺根組織中的時序表達進行了分析，結果表明，BpZFP3、BpZFP4和Bp ZFP12均能夠對高鹽、干旱脅迫作出應答，并且在不同脅迫條件下基因的表達模式各不相同。
　　(2)利用PCR技術，克隆得到BpZFP3全長基因，蛋白保守結構域分析表明，BpZFP3屬于C2H2-Type鋅指蛋白。
　　(3)

3、將BpZFP3構建到植物表達載體pGWB5質粒中，采用農(nóng)桿菌介導法進行擬南芥的遺傳轉化，獲得3個表達量顯著高于對照的轉基因株系，PCR檢測表明基因整合到擬南芥基因組中。在蔡司正直顯微鏡下對T3代幼苗的GFP熒光定位觀察發(fā)現(xiàn)，BpZFP3-GFP融合蛋白在擬南芥根部細胞中只有細胞核內(nèi)發(fā)出綠色熒光，表明BpZFP3蛋白的表達定位于細胞核中。
　　(4)對轉BpZFP3基因的擬南芥株系及非轉基因擬南芥幼苗及成苗分別進行NaCl、Mann

4、itol和ABA脅迫處理，比較各株系的萌發(fā)率、根長、鮮重、成苗的生長狀態(tài)和生理指標等，結果表明，在脅迫條件下過表達株系的萌發(fā)率、根長和鮮重都優(yōu)于WT，從外部形態(tài)上看成苗的生長狀態(tài)也優(yōu)于WT，其生理生化指標(SOD、POD、MDA、脯氨酸、葉綠素)均優(yōu)于WT。以上結果表明BpZFP3基因能在不同程度上提高植物對鹽、干旱的耐受能力。
　　(5)通過PCR擴增技術，克隆獲得長度為1822bp的BpZFP3基因啟動子，序列分析表明，該啟動