內(nèi)皮祖細(xì)胞移植對(duì)兔心肌梗死后心功能的影響.pdf

1、研究背景:心肌梗死或其他器質(zhì)性心血管疾病的終末期均可導(dǎo)致心力衰竭,其中心肌細(xì)胞不可逆轉(zhuǎn)死亡或凋亡是心衰發(fā)病機(jī)制中最重要的始動(dòng)和加速因素之一。傳統(tǒng)的治療方法如藥物、介入和外科手術(shù)均不能使缺失的心肌細(xì)胞再生。近年來(lái)的研究表明,內(nèi)皮祖細(xì)胞(EPC)是一類可以直接分化為血管內(nèi)皮細(xì)胞的前體細(xì)胞,能夠參與的血管生成及機(jī)體局部缺血組織的修復(fù),這使得促進(jìn)血管新生,改善心肌供血,從而提高心肌梗死后的心功能成為可能?；诖死碚?本實(shí)驗(yàn)分離兔骨髓血內(nèi)皮祖細(xì)胞

2、,移植到心肌局部缺血損傷處,觀察其對(duì)兔心肌梗死后心功能和血漿腦鈉肽的影響。
　　研究目的:探討內(nèi)皮祖細(xì)胞移植對(duì)兔心肌梗死后心功能及血漿腦鈉肽影響。
　　實(shí)驗(yàn)方法:
　　第一部分兔骨髓EPC的培養(yǎng)和鑒定和BrdU標(biāo)記
　　1.無(wú)菌條件下抽取兔股骨骨髓,以密度梯度離心法分離出單核細(xì)胞,在EBM-2培養(yǎng)液中培養(yǎng)、觀察。
　　2.采用Flk-1和AC133免疫熒光雙染法,鑒定細(xì)胞表型。
　　第二部分1.選取大

3、耳白兔60只,采用結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈前降支的方法制作心肌梗死模型。
　　2.隨機(jī)分為3組,實(shí)驗(yàn)組大耳白兔注射含EPC的PBS液,對(duì)照組大耳白兔心肌內(nèi)注射等量PBS液,第三組為假手術(shù)組,三組均給予口服阿司匹林、氯吡格雷、單硝酸異酸梨酯、阿托伐他汀鈣、血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑和β腎上腺素能阻滯劑等(劑量按標(biāo)準(zhǔn)體重給予)。
　　3.術(shù)后4 w,行超聲心動(dòng)圖檢查、新生血管密度測(cè)定和血漿腦鈉肽濃度的測(cè)定。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果:1.剛分離的細(xì)

4、胞呈圓形,接種后24 h部分細(xì)胞貼壁,5d后細(xì)胞呈三角形,偶有集落出現(xiàn);8d后細(xì)胞呈長(zhǎng)梭形及多角形,有類似集落樣分布,細(xì)胞分布不均勻。傳代后,細(xì)胞分布較均勻,大部分呈短梭形,有集落樣結(jié)構(gòu)出現(xiàn)。
　　2.7d的EPC經(jīng)AC133與flk-1雙染后,激光掃描共聚焦顯微鏡觀察顯示細(xì)胞呈flk-1強(qiáng)陽(yáng)性(綠色熒光),AC133有弱陽(yáng)性表達(dá)(紅色熒光),而以PBS代替一抗的陰性對(duì)照熒光顯微鏡下無(wú)明顯顯色,CD133和Flk-1雙染雙陽(yáng)性(黃

5、色熒光),證明實(shí)驗(yàn)所得細(xì)胞為正在分化的EPC。
　　3.實(shí)驗(yàn)組左室舒張末期內(nèi)徑(LVEDd)與對(duì)照組相比,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,而實(shí)驗(yàn)組左室射血分?jǐn)?shù)(LVEF)與對(duì)照組相比明顯升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　4.與對(duì)照組相比,實(shí)驗(yàn)組新生毛細(xì)血管數(shù)升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。
　　5.實(shí)驗(yàn)組的血漿BNP水平與對(duì)照組相比明顯降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)論:1.通過(guò)體外分離