蜂毒素對(duì)胃癌細(xì)胞系SGC-7901細(xì)胞的抑制作用及與細(xì)胞凋亡的關(guān)系.pdf

1、目的：研究蜂毒素對(duì)人胃癌細(xì)胞株SGC-7901細(xì)胞增殖及凋亡的影響并探討其作用機(jī)制，為蜂毒素用于臨床方防治癌癥提供可靠的理論基礎(chǔ)和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：使用不同濃度（1、2、4、8、16和32 μg/mL）蜂毒素處理SGC-7901細(xì)胞不同時(shí)間（12、24、36、48和72h）后：（1）采用MTT法測(cè)定腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率；（2）光鏡下觀察藥物處理后細(xì)胞形態(tài)變化；（3）Hoechest33258 染色熒光顯微鏡下檢測(cè)細(xì)胞核的改變

2、；（4）透射電鏡觀察細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的改變；（5）瓊脂糖凝膠電泳觀察凋亡細(xì)胞特征性DNA 條帶；（6）流式細(xì)胞儀法檢測(cè)細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期；（7）免疫組化觀察Bcl-2基因和Bax基因表達(dá)情況；（8）RT-PCR 檢測(cè)Bcl-2、Bax、P53、DR4、DR5mRNA的表達(dá)。
　　 結(jié)果：（1）蜂毒素對(duì)胃癌SGC-7901細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用隨著蜂毒素作用時(shí)間的延長(zhǎng)和濃度的增加而明顯增強(qiáng)，蜂毒素作用48h 后，其IC50 為2.43 μ

3、g/mL，與對(duì)照組比較有顯著性差異（P<0.05）; （2）光鏡下觀察細(xì)胞數(shù)目減少，變小變圓，失去貼壁生長(zhǎng)特性；（3）在熒光顯微鏡下觀察到8 μg/mL 蜂毒素組作用48h 后，細(xì)胞出現(xiàn)典型的凋亡形態(tài)學(xué)改變:細(xì)胞核染色質(zhì)聚集、碎裂,細(xì)胞質(zhì)濃縮（4）透射電鏡觀察顯示蜂毒素組細(xì)胞呈凋亡表現(xiàn)，核固縮、碎裂，染色質(zhì)濃縮，邊集;（5）蜂毒素(4、8 μg/mL)組培養(yǎng)48 小時(shí)后DNA 瓊脂糖凝膠電泳可見典型的梯狀條帶，而對(duì)照組細(xì)胞DNA未見梯狀

4、條帶；（6）流式細(xì)胞DNA直方圖上出現(xiàn)典型的亞二倍體“凋亡峰”，2、4、8 μg/mL濃度蜂毒素作用人胃癌細(xì)胞后的細(xì)胞凋亡率分別為5.69±0.74％、10.58±1.32％、29.57±1.58％。（7）免疫組化染色法顯示，隨著蜂毒素濃度的增大，SGC-7901細(xì)胞Bcl-2 陽(yáng)性表達(dá)逐漸減弱，陽(yáng)性表達(dá)率也逐漸降低，Bax 陽(yáng)性表達(dá)逐漸增強(qiáng)，陽(yáng)性表達(dá)率也逐漸增加，各組之間差異均有顯著性差異（P<0.05）（8）RT-PCR測(cè)定顯示Ba