蛋白水解應(yīng)激及蛋白質(zhì)質(zhì)量控制系統(tǒng)在多巴胺能神經(jīng)元選擇性變性死亡中的研究.pdf

1、華中科技大學(xué)博士學(xué)位論文蛋白水解應(yīng)激及蛋白質(zhì)質(zhì)量控制系統(tǒng)在多巴胺能神經(jīng)元選擇性變性死亡中的研究姓名：王嵐申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：神經(jīng)病學(xué)指導(dǎo)教師：孫圣剛20070519華中科技大學(xué)博士學(xué)位論文6synuclein蛋白聚集過程中為一重要調(diào)節(jié)因素?！娟P(guān)鍵詞】α突觸核蛋白；氧化應(yīng)激；多巴胺；帕金森病第二節(jié)：環(huán)境毒素對泛素蛋白酶體損傷的研究目的探討環(huán)境毒素導(dǎo)致泛素蛋白酶體損傷，誘發(fā)蛋白水解應(yīng)激在多巴胺能神經(jīng)元變性死亡中的作用。方法6OHDA、M

2、PP、魚藤酮及泛素蛋白酶體抑制劑Lactacystin作用于NGF誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞，熒光分光光度計測量各組細(xì)胞蛋白酶體中各蛋白水解酶活性的變化。免疫印跡方法檢測各藥物處理組PC12細(xì)胞內(nèi)泛素化蛋白的水平。應(yīng)用共聚焦免疫熒光雙標(biāo)染色觀察Lactacystin處理后PC12細(xì)胞內(nèi)αsynuclein及泛素的表達(dá)及蛋白聚集現(xiàn)象。結(jié)果熒光底物酶活性測定提示MPP75m、魚藤酮20nM處理使胰蛋白酶，糜蛋白酶及PgH水解酶活性明顯下降(P0.0

3、5）6OHDA200M則誘導(dǎo)三種蛋白酶活性進(jìn)一步下降，熒光指數(shù)分別為7.230.58，79.62.73和4.230.49（正常組為13.91.75，99.35.23和6.900.60，P＜0.05）。免疫印跡結(jié)果證實(shí)對照組細(xì)胞內(nèi)未檢測到相對高分子質(zhì)量的泛素化蛋白質(zhì)，在各神經(jīng)誘變劑處理后，細(xì)胞內(nèi)相對高分子質(zhì)量泛素化蛋白質(zhì)的含量顯著增高。免疫熒光染色顯示Lactacystin作用24h后胞漿內(nèi)αsynuclein及泛素化蛋白表達(dá)增強(qiáng)，并可見