蜂膠水提物對氧化型低密度脂蛋白誘導的平滑肌細胞膽固醇酯聚集及凋亡的影響.pdf

1、目的： 研究蜂膠水提物(water extract propolis,WEP)對氧化型低密度脂蛋白(oxidized lowdensity lipoprotein,ox-LDL) 誘導的人臍動脈平滑肌細胞(buman umbilical arterysmooth muscle cell，HUASMC)膽固醇酯(cholesteryl ester,CE)聚集及凋亡的影響，探討WEP 抗動脈粥樣硬化作用可能的機制，為蜂膠的進一步開發(fā)

2、應(yīng)用提供依據(jù)。 方法： 1.制備 WEP：采用超聲波法萃取泰山蜂膠，其水溶性成分用于實驗研究。 2.培養(yǎng) HUASMC 及鑒定：取新鮮臍帶臍動脈的中膜平滑肌層，采用貼塊法培養(yǎng)HUASMC；經(jīng)免疫細胞化學方法進行鑒定后用于實驗。 3.制備 ox-LDL，測定其氧化修飾程度：以 Cu<'2+>誘導法催化低密度脂蛋白氧化，采用硫代巴比妥酸反應(yīng)物法測定其中MDA含量，以確定其氧化修飾程度。 4.制備平滑肌

3、源性泡沫細胞模型：分別以 25mg/L、50mg/L、75mg/L 三個濃度ox-LDL 與平滑肌細胞共同培養(yǎng)，于 12h、24h、36h、48h、60h五個時間點檢測細胞內(nèi)總膽固醇(total cholesterol,TC)和游離膽固醇(free cholesterol,FC)含量，以TC 減 FC得出CE的含量，CE/TC 比值>50％作為泡沫細胞的標志，選擇 50mg/L OX-LDL 作用48h 作為制備平滑肌源性泡沫細胞模型的

4、適宜條件。 5.實驗分組：培養(yǎng)的細胞隨機分為五組對照組：正常培養(yǎng)基模型組：50 mg/L ox-LDL 作用48hWEP 干預(yù)組：分別以50mg/L、100mg/L、200mg/L 三個濃度的WEP與50mg/Lox-LDL 共同作用 48h： 6.通過油紅O染色法對細胞內(nèi)脂質(zhì)成分進行染色，觀察各組細胞荷脂情況； 7.采用高效液相色譜法測定細胞內(nèi)TC和FC的含量，從中得出CE的含量，根據(jù)細胞蛋白定量。 8.采用流

5、式細胞儀技術(shù) Annexin V/PI 雙染法檢測細胞凋亡率。 結(jié)果： 1.平滑肌源性泡沫細胞模型的制備： 采用 50mg/Lox-LDL 與平滑肌細胞共同培養(yǎng)45h，可使細胞內(nèi) CE/TC比值>50％，而轉(zhuǎn)變?yōu)榕菽毎?2.WEP 對細胞內(nèi)CE聚集影響的形態(tài)學觀察： 經(jīng)油紅O染色后顯示，模型組與對照組相比細胞內(nèi)脂滴含量明顯增多，50 mg/L、100mg/L、200mg/L 三個濃度WEP干預(yù)

6、組細胞內(nèi)脂滴比模型組少，且隨WEP濃度的增高，脂滴的數(shù)量有減少的趨勢。 3.WEP對細胞內(nèi)CE含量的影響： 模型組細胞內(nèi)CE含量高于對照組(P<0.01)，50 mg/L、100mg/L、200mg/L 三個濃度WEP干預(yù)組細胞內(nèi)CE的含量都低于模型組(P<0.01)，且隨WEP濃度的增高細胞內(nèi)CE含量有減少的趨勢； 4.WEP 對細胞凋亡的影響： 模型組細胞凋亡率高于對照組(P<0.01)，50 mg/

7、L、100mg/L、200mg/L 三個濃度WEP 干預(yù)組細胞凋亡率都低于模型組(P<0.01)，且隨WEP濃度的增高細胞凋亡率有降低的趨勢。 5.細胞內(nèi)CE含量與細胞凋亡率之間相關(guān)性分析： 細胞內(nèi)CE含量與細胞凋亡率之間存在正相相關(guān)關(guān)系，相關(guān)系數(shù)為0.964，P<0.01。 結(jié)論： 1.ox-LDL<'1> 引起體外培養(yǎng)的HUASMC 細胞內(nèi)CE聚集，而轉(zhuǎn)變?yōu)榕菽毎瑫r也能導致HUASMC凋亡率增加