劑量密集新輔助化療與RNAi下調hTERT基因在乳腺癌中作用的研究.pdf

1、研究背景：新輔助化療(NAC)作為局部進展期乳腺癌(LABC)的標準治療方案已經(jīng)得到廣泛接受，新輔助化療后獲得病理完全緩解(pCR)的乳腺癌病人的長期生存率可以得到顯著改善。因此，如何提高新輔助化療的療效和在新輔助化療前預測新輔助化療療效成為了LABC治療的研究重點。RNA干擾(RNAi)是新的基因阻斷技術，siRNA在轉錄后水平使靶基因沉默，在基因治療方面顯示巨大的前景。 研究目的：為提高LABC新輔助化療的療效，采用表阿霉素

2、加紫杉醇雙周方案劑量密集新輔助化療，觀察其療效、毒副反應及病理組織學改變。為探尋能預測新輔助化療療效的有效指標，并且證實端粒酶逆轉錄酶(hTERT)有無預測新輔助化療療效的作用，比較新輔助化療前hTERT的表達與新輔助化療前病人臨床病理特征的相關性以及二者與新輔助化療療效之間的相互關系，對比新輔助化療前后hTERT表達變化及其與療效問的關系，為如何在新輔助化療前預測其療效提供了依據(jù)。為進一步提高乳腺癌的治療效果，采用RNAi基因敲除技術

3、，敲除或下調hTERT基因的表達，探討基因治療在乳腺癌治療中作用。 材料與方法：將2002年5月至2006年1月，41例未經(jīng)治療的的IIb期至IIIb期的LABC病人入組。劑量密集新輔助化療方案為表阿霉素40-50mg／m2，d1，靜注；紫杉醇150—175m/m2，d2，靜滴3h，以上藥物按次序給予，每2周重復1次，每2周為1個療程，均接受2個療程的治療。收集在新輔助化療前用14G空芯針對乳腺癌腫瘤原發(fā)灶進行穿刺活檢獲取的標本

4、和新輔助化療后所有病人均行乳腺癌根治術后所獲取的標本，用免疫組化和RT-PCR的方法檢測其hTERT的mRNA和蛋白表達：將新輔助化療前臨床病理學指標、新輔助化療2個療程后評估的療效以及上述檢測結果進行分析。另外，依據(jù)RNAi原理，使用RNAi—DNA載體技術，構建靶向hTERT基因的siRNA，轉導入乳腺癌MCF一7細胞，在瘤細胞內誘導RNAi，采用細胞增殖抑制實驗、RT-PCR法、Western-blot等技術檢測siRNA處理前后

5、瘤細胞增殖及hTERT基因表達。 研究結果： 第一部分結果：①表阿霉素加紫杉醇劑量密集新輔助化療對4l例LABC病人的治療中，腫瘤原發(fā)灶總有效率85．4％，其中臨床完全緩解(cCR)19．5％(8／41)，部分緩解(PR)65．9％(27／41)，pCRl2．2％(5／41)。②新輔助化療前后病理學改變有明顯差異，新輔助化療后腫瘤細胞大多出現(xiàn)退行性改變，可見細胞核固縮，碎裂和細胞壞死等以及有明顯的間質水腫，可見多量慢性炎

6、癥細胞浸潤，程度不等的纖維組織增生膠原化。③主要的毒副反應為血液系統(tǒng)毒性，白細胞下降、中性粒細胞減少癥主要出現(xiàn)在III、IV度反應中，分別為63．4％和70．7％，且9．8％的病人出現(xiàn)白細胞減少性發(fā)熱，但在G-CSF的支持下和預防使用抗生素等，所有病人均能夠完成新輔助化療計劃。 第二部分結果：①新輔助化療前癌組織中hTERTmRNA和蛋白的陽性表達率分別為73．1％、80．5％，沒有顯著性差異，呈顯著正相關，且與臨床病理學參數(shù)沒

7、有相關性。②新輔助化療前腫瘤最大徑小于5cm的T2期腫瘤達到cCR的比例顯著高于大于5cm的T3和T4期的病人；但不同腫瘤大小發(fā)生pCR的幾率是一致的。不同臨床分期發(fā)生cCR和pCR的幾率沒有顯著性差異。hTERTmRNA及蛋白陽性表達的病人發(fā)生cCR和pCR的幾率顯著性低于hTERTmRNA及蛋白陰性表達的病人。③新輔助化療前臨床病理學參數(shù)、hTERT的表達與cCR或pCR均沒有獨立的相關關系。④新輔助化療前hTERTmRNA和蛋白陽

8、性表達率分別73．2％、80．5％顯著高于新輔助化療后其陽性表達率29．3％、36．6％。 第三部分結果：①成功構建hTERT-pGenesil—siRNA重組質粒。②乳腺癌MCF．7細胞經(jīng)hTERT-pGenesil-siRNA處理后，hTERT的mRNA和蛋白表達分別下調了61．7％、52．8％，且對乳腺癌MCF-7細胞生長平均增殖抑制率達61．4％，與對照N-pGenesil—siRNA處理組有顯著性差異。 結論：

9、①表阿霉素加紫杉醇雙周方案劑量密集新輔助化療在LABC的治療中療效顯著，其毒副反應的耐受性良好，故有可能作為LABC新輔助化療的一線化療方案。②hTERT與乳腺癌發(fā)生密切相關，說明了hTERT在激活端粒酶的活性和促使腫瘤細胞增殖中起了重要作用。③hTERT的高陽性表達病人達到cCR和pCR較低，可能是由于hTERT高表達促使腫瘤細胞增殖導致惡性程度增高所致。④腫瘤大小、hTERTmRNA和蛋白表達與新輔助化療后的cCR沒有獨立的相關關系