重組hIFN-α-2b-BCG對(duì)人外周血免疫細(xì)胞鐘樣蛋白受體表達(dá)調(diào)節(jié)及其抗腫瘤作用的研究.pdf

1、BCG腔內(nèi)灌注是防治膀胱腫瘤的重要輔助手段，它在治療淺表膀胱腫瘤、預(yù)防其復(fù)發(fā)以及防止膀胱腫瘤惡性度增高方面的良好效果已被證實(shí)，但其抗腫瘤機(jī)理尚不明確，目前多認(rèn)為與BCG對(duì)免疫系統(tǒng)的作用有關(guān)；鐘樣蛋白受體是最近幾年發(fā)現(xiàn)的在機(jī)體免疫系統(tǒng)中起重要作用的一種跨膜蛋白，相應(yīng)配體刺激可以激活鐘樣蛋白受體介導(dǎo)的跨膜信號(hào)傳導(dǎo)通路，進(jìn)一步激活核轉(zhuǎn)錄因子，調(diào)節(jié)細(xì)胞因子的表達(dá)，產(chǎn)生IL-1、IL-6、IL-12、IFN-γ、TNF-α等細(xì)胞因子，活化機(jī)體免疫

2、細(xì)胞來(lái)殺傷腫瘤細(xì)胞或直接導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞凋亡。 目前臨床灌注所用的是野生BCG，臨床證明它在防治膀胱腫瘤方面效果明顯，但是也存在一些問(wèn)題：有半數(shù)病人對(duì)其不反應(yīng)，而且病人副作用比較明顯，嚴(yán)重影響治療效果。本實(shí)驗(yàn)室成功研制的重組人IFN-a-2b-BCG是一種新型菌苗，與野生BCG比較，除了保留野生BCG的基本特性外，優(yōu)勢(shì)在于可以持續(xù)分泌IFN-α-2b，BCG和IFN-α-2b二者同時(shí)作用可以產(chǎn)生最佳的免疫誘導(dǎo)效應(yīng)，其抗腫瘤作用更明顯

3、，副作用發(fā)生較少，更適合病人長(zhǎng)期灌注，是一種有很大社會(huì)價(jià)值的菌苗。 本課題應(yīng)用流式細(xì)胞儀、免疫熒光、MTT等技術(shù)方法比較研究重組hIFN-α-2b-BCG和野生BCG對(duì)人體免疫細(xì)胞鐘樣蛋白受體表達(dá)的調(diào)節(jié)以及表達(dá)鐘樣蛋白受體免疫細(xì)胞抗腫瘤效應(yīng)，以期能明確hIFN-α-2b-BCG抗腫瘤機(jī)制，為臨床應(yīng)用重組hIFN-α-2b-BCG提供理論支持，同時(shí)為膀胱腫瘤的防治提出一條新的思路；將鐘樣蛋白受體增強(qiáng)劑與重組hIFN-α-2b-BC

4、G同時(shí)應(yīng)用于膀胱腫瘤治療。 本研究由三部分組成，第一部分進(jìn)行重組hIFN-α-2b-BCG和野生BCG對(duì)人外周血免疫細(xì)胞鐘樣蛋白受體表達(dá)調(diào)節(jié)的比較。提取健康人外周血淋巴細(xì)胞，以相同劑量的重組hIFN-α-2b-BCG和野生BCG作用，淋巴細(xì)胞為空白對(duì)照，流式細(xì)胞儀檢測(cè)二者刺激后的淋巴細(xì)胞表面鐘樣蛋白受體表達(dá)情況。結(jié)果表明：二者對(duì)淋巴細(xì)胞表面鐘樣蛋白受體的表達(dá)都有正調(diào)節(jié)效應(yīng)，重組hIFN-α-2b-BCG與野生BCG相比有更強(qiáng)的正

5、調(diào)節(jié)作用(P=0.013)。 第二部分探討了重組hIFN-α-2b-BCG和野生BCG對(duì)人外周血免疫細(xì)胞鐘樣蛋白受體表達(dá)調(diào)節(jié)差異的可能原因。提取健康人外周血淋巴細(xì)胞，以相同劑量的重組hIFN-α-2b-BCG上清、野生BCG上清以及醫(yī)用干擾素作用，淋巴細(xì)胞為空白對(duì)照，流式細(xì)胞儀檢測(cè)不同組淋巴細(xì)胞表面鐘樣蛋白受體表達(dá)情況。結(jié)果表明：重組hIFN-α-2b-BCG上清和醫(yī)用干擾素對(duì)人外周血淋巴細(xì)胞鐘樣蛋白受體表達(dá)都有正調(diào)節(jié)效應(yīng)(P=

6、0.001)，而且二者正調(diào)節(jié)作用相差無(wú)幾(P=0.091)；野生BCG上清對(duì)外周血淋巴細(xì)胞表面鐘樣蛋白受體的表達(dá)幾乎沒(méi)有影響(P=0.702)。從這部分研究我們可以推知在第一部分研究中重組hIFN-α-2b-BCG對(duì)鐘樣蛋白受體表達(dá)有更強(qiáng)正調(diào)節(jié)作用的原因可能是由于重組hIFN-α-2b-BCG可以分泌IFN-α-2b至上清中，而IFN-α-2b本身對(duì)淋巴細(xì)胞鐘樣蛋白受體有正調(diào)節(jié)效應(yīng)，從而使重組hIFN-α-2b-BCG的調(diào)節(jié)作用強(qiáng)于野生

7、BCG。 第三部分是表達(dá)鐘樣蛋白受體淋巴細(xì)胞抗腫瘤效應(yīng)的研究。我們以處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的膀胱腫瘤細(xì)胞(5637細(xì)胞)作為靶細(xì)胞，以重組hIFN-α-2b-BCG、野生BCG、重組hIFN-α-2b-BCG上清、野生BCG上清、醫(yī)用干擾素刺激過(guò)的外周血淋巴細(xì)胞和未刺激過(guò)的淋巴細(xì)胞作為效應(yīng)細(xì)胞，設(shè)置自然釋放組和Trionx-100最大殺傷組，MTT法比較各組抗腫瘤效應(yīng)。結(jié)果表明：不同組的淋巴細(xì)胞對(duì)膀胱腫瘤細(xì)胞皆有殺傷作用，殺傷效應(yīng)程度不

8、同，從強(qiáng)到弱依次為：rBCG組、wBCG組、rBCG上清組、醫(yī)用干擾素組、wBCG上清組、空白組；其中rBCG組是wBCG組的1.3倍(P=0.003)，rBCG上清組是wBCG上清組的2.88倍(P=0.000)，rBCG上清組和醫(yī)用干擾素組相差無(wú)幾(p=0.897)。淋巴細(xì)胞殺傷腫瘤細(xì)胞的強(qiáng)弱順序與其鐘樣蛋白受體表達(dá)多少順序一致，這說(shuō)明被激活的淋巴細(xì)胞抗腫瘤作用可能與鐘樣蛋白受體有關(guān)。本研究進(jìn)行了重組hIFN-α-2b-BCG的抗腫