雌激素對(duì)大鼠急性缺血后肢血管新生影響的研究.pdf

1、目的：研究雌激素在肢體缺血代償過(guò)程中，對(duì)VEGF表達(dá)及骨骼肌微血管密度（MVD）的影響，探討雌激素影響缺血肢體病理生理變化的作用機(jī)制。方法：SD雄性大鼠120只，隨機(jī)選24只大鼠作為對(duì)照組，其余96只大鼠隨機(jī)分為兩實(shí)驗(yàn)組，每組48只，一組為后肢缺血組（簡(jiǎn)稱I組）,行右后肢單側(cè)股動(dòng)脈結(jié)扎切除術(shù)；另一組為后肢缺血+雌激素組（簡(jiǎn)稱I+E組）,手術(shù)方式與I組相同，并于手術(shù)當(dāng)天開始皮下注射17β-雌二醇(30μg/kg·d)至實(shí)驗(yàn)結(jié)束。各組分別于

2、術(shù)后1天、3天、7天、14天、28天及56天取材，每次8只大鼠，獲取大鼠右后肢骨骼肌固定及石蠟包埋，免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)骨骼肌VEGF蛋白表達(dá)及CD34表達(dá)，同時(shí)抽血ELISA法測(cè)定血清VEGF數(shù)值。對(duì)照組大鼠僅作右后肢皮膚切開和縫合，與實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物在同一時(shí)相點(diǎn)取材，每次4只大鼠。結(jié)果：1. 免疫組化染色骨骼肌VEGF蛋白表達(dá)檢測(cè)結(jié)果：對(duì)照組大鼠各時(shí)相點(diǎn)骨骼肌VEGF蛋白表達(dá)呈陰性或極弱陽(yáng)性。兩實(shí)驗(yàn)組第一天骨骼肌內(nèi)未發(fā)現(xiàn)VEGF陽(yáng)性表達(dá)，

3、陽(yáng)性系數(shù)為0；第三天均發(fā)現(xiàn)VEGF蛋白陽(yáng)性表達(dá)，其表達(dá)強(qiáng)度在第7天達(dá)到高峰（I組：3.25±0.46；I+E組：3.75±0.64），以后呈下降趨勢(shì)，在56天明顯減弱（I組：0.88±0.64；I+E組：1.75±0.71）。I+E組VEGF蛋白表達(dá)較高，與I組比較在各時(shí)相點(diǎn)（第1天除外）均有顯著增高（P<0.05）。2. 血清VEGF檢測(cè)結(jié)果：對(duì)照組大鼠各時(shí)相點(diǎn)血清VEGF數(shù)值波動(dòng)不大（57.58±2.78pg/ml）。兩實(shí)驗(yàn)組第一天

4、大鼠血清VEGF數(shù)值即升高(I組：63.63±5.45 pg/ml；I+E組：74.5±5.37pg/ml)，其中I+E組與對(duì)照組比較有顯著差異（P<0.01）；于7天達(dá)到高峰（I組：139.13±5.22 pg/ml；I+E組：159.75±4.33pg/ml），以后緩慢回落。I+E組與I組比較，在各時(shí)相點(diǎn)血清VEGF數(shù)值均顯著升高（P<0.01）。3. 骨骼肌微血管密度（MVD）檢測(cè)結(jié)果：以CD34染色陽(yáng)性的血管數(shù)作為骨骼肌微血管密

5、度（MVD）。對(duì)照組大鼠各時(shí)相點(diǎn)骨骼肌MVD變化不大(14.58±1.99)。兩實(shí)驗(yàn)組第一天骨骼肌MVD明顯降低（I組：9.75±2.05；I+E組：11.88±2.17），與對(duì)照組比較有顯著差異（P<0.05）；以后MVD持續(xù)增高，在14天達(dá)峰值（I組：30.25±1.98；I+E組：40.50±2.20），然后逐漸下降，但仍維持在一定水平。在各時(shí)相點(diǎn)（第1天除外），I+E組MVD均較I組顯著升高（P<0.05）。4. VEGF表達(dá)與

6、MVD之間的關(guān)系：直線相關(guān)分析結(jié)果表明，I組和I+E組內(nèi)兩種VEGF表達(dá)結(jié)果與相應(yīng)組MVD之間均具有顯著相關(guān)性（P<0.01）。結(jié)論：1. 肢體缺血后VEGF表達(dá)增強(qiáng)，于7天達(dá)高峰，但其表達(dá)有一定時(shí)限性；MVD也呈動(dòng)態(tài)變化，在14天達(dá)高峰，與VEGF表達(dá)之間有一個(gè)時(shí)間差。兩實(shí)驗(yàn)組內(nèi)VEGF表達(dá)與MVD之間均有顯著相關(guān)性，提示VEGF具有促血管生成作用。2. 在缺血早期，肢體因VEGF表達(dá)增強(qiáng)而具有一定的代償能力，缺血缺氧是造成肢體VEG