CTLA4-Ig的表達(dá)、修飾和腫瘤免疫治療策略性研究.pdf

1、軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院博士后研究工作報(bào)氣V∥81960墨cTLA4Ig的表達(dá)、修飾和腫瘩免疫治療策略性研究合作導(dǎo)師：沈倍奩院士黎燕研究員郭寧研究員博士后：干繼云專業(yè)：分子免疫學(xué)流動(dòng)站名稱：工作起始日期：完成日期：報(bào)告日期：?jiǎn)挝幻Q：軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)流動(dòng)站1999，92002，12002，1軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所現(xiàn)在瓣硬變認(rèn)為，瓣訣闋釋異體移攘捺斥反應(yīng)魄綴娃途徑是誘導(dǎo)移植受體產(chǎn)生針對(duì)移植抗原的特異鏈免疫辯受，僵至今在該領(lǐng)域尚未肖突破性

2、進(jìn)展。本研究提出了誘導(dǎo)供者特弗性免疫抑制及耐受的新設(shè)想和新機(jī)制?；舅悸肥牵贺杌蛩旖M的方法，將cTLA4Ig與介導(dǎo)袋蛋白的翻譯后糖目旨修飾的信號(hào)肽部分融合，表達(dá)于適當(dāng)?shù)乃拗骷?xì)胞，表達(dá)后形成GPI修怖的嵌合蛋白(GPI—CTLA4Ig)，嵌合器白經(jīng)縫化屠用予處理移植物細(xì)胞，一方顙逶過封閉移檀物細(xì)胞上的B7分子而逃避受體宿主的免疫抑制；另一方面，由于移植物中的T細(xì)胞表露通過GPI嵌合了一定數(shù)量的CTLA4Ig兩優(yōu)先與密主緞胞上的B7分子結(jié)

3、合，阻顴了宿主抗原對(duì)移攮物中T纓胞的激活，從兩W有效抑制移植物抗宿主反應(yīng)。本磅究奩已獲得CTLA4基聯(lián)的基否出上，用基囂重組豹方法，將從衰變期速因子(DAF)來(lái)源的GPI信號(hào)肽融合于CTLA4Ig的羧基端，構(gòu)建了GPIcTLA4Ig嵌合分子。將嵌食分子究隆到具有二氫葉酸還原酶篩選標(biāo)記基因的真核表達(dá)載體pcIdh心中，在二氫葉陵還原酶缺陷的cHO細(xì)胞中獲得了穩(wěn)定表達(dá)，經(jīng)細(xì)胞免疫熒光檢測(cè)證實(shí)，表達(dá)的GPICTLA4Ig嵌合分予，主要整合在細(xì)

4、胞膜上，兩分泌型的￡T乙醚艷劉主要表達(dá)在纓胞漿中，拐步說(shuō)瞞GpI償母膠起翻了應(yīng)有豹作用。本磷究將嵌臺(tái)性GPI，C甩A4Ig章每建到食二氫咔酸還原薅(強(qiáng)蠹)鮑囊核襲這載體pcI魏盤蘑，轉(zhuǎn)染dh矗缺陷的cH0細(xì)胞系，熠MTX加壓篩選后，用細(xì)胞免疫熒光染色的方法發(fā)現(xiàn)，有的纓胞膜上融合蛋囪的表達(dá)燕很離。經(jīng)過適當(dāng)豹克隆篩選，有可能獲得離表達(dá)的緞臆株。我們將細(xì)臆大量擴(kuò)增培養(yǎng)，從5l妒細(xì)胞中，可大約得到lmg的GPI錨定蛋自。我們下一步的工作，將要探