肝細胞生長因子及其聯(lián)合吡柔比星對肝癌細胞增殖和凋亡的影響.pdf

1、目的：本研究旨在明確肝細胞生長因子(HGF)是否對肝癌細胞株HepG2有生長抑制作用及其可能機制以及HGF能否誘導(dǎo)肝癌細胞發(fā)生凋亡；探討HGF與吡柔比星(Pirarubicin或Theprubicin，THP)在體外聯(lián)合應(yīng)用對肝癌細胞是否有協(xié)同治療作用；探討HGF在肝細胞癌治療中的應(yīng)用價值，為今后進一步研究提供可行性和相應(yīng)的理論依據(jù)。方法：以人肝癌細胞株HepG2為研究對象，采用MTT比色試驗法，檢測不同HGF濃度和作用時間對肝癌細胞生

2、長增殖的影響；免疫細胞化學(xué)染色檢測細胞增殖核抗原(PCNA)的表達；應(yīng)用DNA熒光染料Hoechst33258對肝癌細胞核染色，熒光顯微鏡下觀察凋亡細胞形態(tài)并計算凋亡指數(shù)和采用流式細胞術(shù)(FCM)檢測HGF作用后肝癌細胞凋亡率的變化；采用FCM檢測HGF對肝癌細胞生長周期和RT-PCR技術(shù)，檢測HGF對肝癌細胞p16基因表達的影響。結(jié)果：1：MTT比色試驗顯示HGF對人肝癌細胞HepG2活性有顯著的抑制作用，并且呈現(xiàn)時間和劑量的依賴性，

3、隨藥物濃度加大和作用時間延長，存活細胞數(shù)量逐漸減少。2：HGF對HepG2細胞的增殖活性具有抑制作用，藥物作用4d后細胞PCNA的表達顯著降低。3：Hoechst染色實驗及流式細胞術(shù)結(jié)果顯示HGF可誘導(dǎo)HepG2細胞凋亡。與對照組比較，實驗組細胞凋亡指數(shù)(AI)和凋亡率(AR)明顯增加[對照組分別為(8.53±0.75)％，(10.86±3.38)％，而10ng/mL、50ng/mLHGF作用4d后，HepG2細胞的凋亡指數(shù)分別為：(1

4、5.86±3.05)％，(21.4±4.34)％；凋亡率分別為：(17.53±1.58)％，(20.73±4.70)％]。4：隨著HGF濃度增大S期細胞明顯減少[試驗組10μg/L，50μg/LHGF：(7.5±4.4)％，(7.8±1.6)％vs對照組0μg/LHGF:16.6±2.8％；P＜0.05，P＜0.01]同時可見G0/G1期細胞累積現(xiàn)象[試驗組10μg/L，50μg/LHGF：(80.5±3.2)％，(73.1±3.9)％

5、vs對照組0μg/LHGF：(59.6±6.2)％；P＜0.05，P＜0.01]。5：經(jīng)HGF作用后肝癌細胞的p16基因表達上調(diào)。6：肝癌細胞經(jīng)HGF和THP聯(lián)合處理后，細胞凋亡率與壞死比例升高，分別與單純HGF或單純THP處理組相比差異顯著。結(jié)論1：HGF可通過抑制細胞增殖和誘導(dǎo)凋亡途徑抑制人肝癌細胞HepG2的生長。2：HGF通過上調(diào)p16表達阻滯細胞分裂于G0/G1期，可能為其抑制人肝癌細胞HepG2的生長作用的重要機制之一。3：