GLYPICAN-3基因在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)與意義.pdf

1、第二軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文GLYPICAN3基因在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)與意義姓名：蔣虹申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專(zhuān)業(yè)：外科學(xué)（胸心外科）指導(dǎo)教師：徐志飛20040401第=率E大掌博女掌∞論文GIypican一3基因在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)研究摘要肺癌是嚴(yán)重危害人類(lèi)健康的惡性腫瘤之一，也是全世界目前發(fā)病率和死亡率最高的癌癥。然而由于g審癌的發(fā)病隱匿、惡性程度高、發(fā)展迅速、治療困難，80％肺癌患者就診時(shí)己處于進(jìn)展期，傳統(tǒng)的放療、化療及手術(shù)治療并不能降

2、低病死率，即使獲得手術(shù)的病人的復(fù)發(fā)率也很高，因此一直是我國(guó)醫(yī)學(xué)界面臨的重大課題。大量研究表明肺癌的發(fā)生發(fā)展是一個(gè)多基因參與、多階段發(fā)生、長(zhǎng)時(shí)聞形成而復(fù)雜的病變過(guò)程，這期間基因突變、原癌基因激活、抑癌基因失活及其導(dǎo)致一系列信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的異常等分子病理學(xué)改變貫穿了肺癌病變的全過(guò)程。因此，尋找篩選出方法簡(jiǎn)便、靈敏性和特異性可靠的腫瘤標(biāo)記物，確定新的肺癌的干預(yù)靶點(diǎn)，從分子水平輔助肺癌的早期診斷，監(jiān)測(cè)肺癌的發(fā)生發(fā)展及預(yù)后，及時(shí)進(jìn)行基因生物治療，促進(jìn)肺

3、癌的早期確診率、治愈率有重大的臨床應(yīng)用價(jià)值。本文就這一目的以非小細(xì)胞肺癌(NScLc)為研究對(duì)象，主要是尋找與NSCLC相關(guān)的基因，檢測(cè)其在NSCLC中的表達(dá)情況，為該基因?qū)SCLC作用的基礎(chǔ)研究和臨床應(yīng)用提供依據(jù)。第一部分陣列文庫(kù)和基因芯片篩選肺癌相關(guān)基因目的尋我與NSCLC相關(guān)的基因。方法利用平均插入子大小160kb的真核表達(dá)載體pcDNA31正常人胎盤(pán)cDNA質(zhì)粒文庫(kù)制備陣列文庫(kù)，以此陣列文庫(kù)進(jìn)行PCR擴(kuò)增，將PCR產(chǎn)物利用Bi

4、oRoboticsTAS多功能基因芯片點(diǎn)樣儀點(diǎn)至尼龍膜上制備成陣列文庫(kù)基因芯片。取2對(duì)NSCLC癌組織及其相對(duì)應(yīng)的癌旁正常肺組織抽提其總RNA，反轉(zhuǎn)錄制成cDNA并行生物素探針標(biāo)記，與陣列文庫(kù)芯片雜交顯影，觀察尼龍膜基因芯片上分別與肺癌組織和正常肺組織雜交后差異顯影的克隆點(diǎn)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)一個(gè)克隆位點(diǎn)在癌組織雜交芯片膜上特異性表達(dá)下降，癌旁正常肺組織雜交芯片膜上比癌組織雜交芯片膜上相對(duì)應(yīng)的克隆點(diǎn)表達(dá)增強(qiáng)數(shù)倍。挑出該克隆，經(jīng)基因測(cè)序后與Gene