鼻咽癌細(xì)胞肝轉(zhuǎn)移亞群的篩選及基因表達(dá)譜分析.pdf

1、第一軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文鼻咽癌細(xì)胞肝轉(zhuǎn)移亞群的篩選及基因表達(dá)譜分析姓名：韓春申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：病理與病理生理學(xué)指導(dǎo)教師：姚開泰20060603中文摘要檢測基因表達(dá)水平的新技術(shù)。它具有靈敏度高、檢測量大等優(yōu)點，可同時檢測成千上萬個基因的表達(dá)情況或平行對比這些基因在不同樣本中的表達(dá)，被認(rèn)為是一種高通量檢測基因表達(dá)水平的方法。因此，基因芯片技術(shù)可以成為探討腫瘤轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制的主要手段。腫瘤細(xì)胞原位移植技術(shù)的出現(xiàn)，極大的推動了腫瘤動物模型

2、的發(fā)展。將人類腫瘤組織或腫瘤細(xì)胞原位種植到免疫缺陷的動物體內(nèi)，能夠很好的模擬腫瘤在體內(nèi)的生長、侵襲、轉(zhuǎn)移過程，復(fù)制出與患者十分接近的臨床特征，為研究腫瘤的發(fā)生發(fā)展、轉(zhuǎn)移以及開展實驗性的治療干預(yù)，提供了良好的研究對象。近年來新興的腫瘤分子成像技術(shù)，使人們能夠在活體動物體內(nèi)觀察腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移過程，提高人們對微小腫瘤和腫瘤微轉(zhuǎn)移的認(rèn)識。綠色熒光蛋白(greenfluorescentprotein，GFP)廣泛應(yīng)用于可視化動物模型的研究，使得人

3、們可以在活體狀態(tài)下觀察腫瘤的演進(jìn)規(guī)律，極大地推動了腫瘤的早期生長、發(fā)展規(guī)律的研究，有效的彌補了人體腫瘤僅能通過活檢、手術(shù)標(biāo)本和尸檢等進(jìn)行分析的不足。本實驗通過對已標(biāo)記GFP的人鼻咽癌高轉(zhuǎn)移細(xì)胞株5—8F—EGFP進(jìn)行裸鼠體內(nèi)連續(xù)傳代，人為地施加選擇壓力，成功的建立了人鼻咽癌細(xì)胞肝轉(zhuǎn)移亞群5—8F—H3B—EGFP。通過體內(nèi)體外實驗證明其轉(zhuǎn)移能力明顯高于母系，并且有明顯的肝轉(zhuǎn)移傾向。我們利用基因芯片技術(shù)比較了兩株細(xì)胞5—8F—EGFP和5

4、—8F—H3B—EGFP的基因表達(dá)譜差異(每株細(xì)胞重復(fù)3次)，通過統(tǒng)計學(xué)分析，獲得了337個表達(dá)差異兩倍以上的基因。對這281個差異表達(dá)基因進(jìn)行生物學(xué)功能分類、文獻(xiàn)調(diào)研以及基因功能分析，找到了16個與腫瘤肝轉(zhuǎn)移相關(guān)的基因。通過聚類分析發(fā)現(xiàn)，這16個基因能夠很好的區(qū)分人鼻咽癌高轉(zhuǎn)移細(xì)胞株5—8F—EGFP和人鼻咽癌細(xì)胞肝轉(zhuǎn)移亞群5—8F—H3B—EGFP?，F(xiàn)簡述如下：一利用裸鼠脾臟注射人鼻咽癌高轉(zhuǎn)移細(xì)胞株5—8F—EGFP，獲得鼻咽癌肝轉(zhuǎn)