E2F1蛋白與Sedlin蛋白相互作用的初步探討.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的：初步探討E2F1蛋白和Sedlin蛋白在體內體外有無相互作用，進而為遲發(fā)性脊柱骨骺發(fā)育不良(SEDT)的靶向治療提供新的思路。
　　方法：以含人E2F1全長cDNA序列的質粒為模板，用常規(guī)PCR擴增E2F1，構建pcDNA3.1-E2F1-FLAG真核表達載體，將酶切鑒定正確的重組質粒測序。將pcDNA3.1-E2F1-FLAG瞬時轉染至HEK293T細胞中，同時制備GST-Sedlin融合蛋白，通過GST Pull-dow

2、n技術檢測E2F1蛋白與Sedlin蛋白在體外有無相互作用。將pcDNA3.1-E2F1-FLAG和pCDGFP-Sedlin分別瞬時轉染到COS-7細胞中，觀察兩者在細胞內的定位現(xiàn)象，將pcDNA3.1-E2F1-FLAG與pCDGFP-Sedlin一起瞬時轉染到COS-7細胞中，觀察兩者在細胞內的共定位現(xiàn)象。將pcDNA3.1-E2F1-FLAG和pCDGFP-Sedlin瞬時轉染至HEK293T細胞，通過免疫共沉淀技術檢測E2F1

3、與Sedlin蛋白在哺乳動物細胞內有無相互作用。
　　結果：酶切鑒定和測序結果都證明了pcDNA3.1-E2F1-FLAG質粒構建成功。GST Pull-down實驗表明，在體外條件下，E2F1蛋白與Sedlin蛋白存在相互作用。在熒光顯微鏡下觀察到，E2F1蛋白主要分布在COS-7細胞核內，而Sedlin蛋白除了細胞核，在細胞質內也有分布；共定位實驗觀察E2F1蛋白與Sedlin蛋白在核內存在部分共定位。免疫共沉淀實驗表明，在H

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