膜-細胞骨架聯(lián)接分子ezrin對肝細胞肝癌生長和轉移的影響.pdf

1、後旦大學學校代碼：10246學號：031104131博士學位論文膜一細胞骨架聯(lián)接分I“ezrin對肝細胞肝癌生長和轉移的影響院專姓系：業(yè)：名：中山醫(yī)院腫瘤學張巖指導教師：割康達教授中文摘要的影響。方法：選取4株肝癌細胞系(SF／SMMC7721、MHCC97一H、MHCC一1和HepG2)作為研究對象，針對ezrin基因設計小干擾RNA(SmallinterferingRNA，siRNA)并通過脂質體轉染入細胞。分別通過熒光實時定量聚合

2、酶鏈反應(RealtimePCR)和Western印跡驗證siRNA對ezrin在基因和蛋白水平的下調及下調作用隨轉染時間的變化。根據(jù)Western印跡的結果選取ezrin蛋白表達最低的時間點檢測干擾后肝癌細胞生物學行為的改變。運用四甲基偶氮唑蘭(MTT)法檢測肝癌細胞增殖能力的變化；流式細胞儀檢測細胞周期；電子顯微鏡觀察細胞偽足的形態(tài)和數(shù)量改變；transwell實驗檢測肝癌細胞運動和侵襲能力的變化。結果：熒光實時定量聚合酶鏈反應和W

3、estern印跡顯示ezrinsiRNA對ezrin在基因和蛋白水平均有顯著的下調作用。下調ezrin蛋白可顯著減慢4株肝癌細胞的生長速度(PO05)，處于分裂期的肝癌細胞比例明顯下降。腫瘤細胞的運動侵襲能力下降，細胞偽足變短，且偽足的形成數(shù)量顯著減少(sF／s刪c772l：20830個／細胞與13224個／細胞，PO05：MttCC97一H：18427個／細胞與14029個／細胞，尺O01；姍Cc一1：22635個／細胞與13319個

4、／細胞，尺O01：HepG2：31029個／細胞與17823個／細胞，PO01)。穿過人工基底膜的細胞數(shù)量也明顯減少(SF／s硎c7721：49977個與319452個，只O05：MHCC97一H：58542個與33O33個，只O01；MHCC一1：57661個與28334個，尺OOl；HepG2：37330個與25323個，尸O01)。結論：ezrin在肝癌生長和侵襲轉移過程發(fā)揮重要的作用，有可能成為抑制肝癌復發(fā)轉移的關鍵分子。三ez

5、rin對肝癌生長和轉移影響的體內研究目的：選取高轉移潛能肝癌細胞系MHCC一97H為研究對象，通過裸鼠體內實驗進一步驗證ezrin對肝癌生長和轉移的影響。方法：通過轉染入細胞持續(xù)表達ezrinsiRNA的質粒，篩選出一株ezrin下調穩(wěn)定株。體外鑒定其生長和運動侵襲能力后，進行裸鼠皮下接種實驗，通過繪制腫瘤生長曲線和比較ezrin下調前后腫瘤的淋巴結和肺轉移率來評估ezrin對肝癌生長和轉移的影響。結果：轉染質粒后的姍Cc一97H經(jīng)過G

6、418篩選后，選取ezrin抑制率最高的命名為97Hezrin(L)。體外實驗結果顯示97Hezrin(L)的惡性增殖能力和運動侵襲能力均明顯下降(po01)。裸鼠皮下接種腫瘤后2周成瘤，97Hczrin(L)的生長速度明顯慢于MHCC97H，到6周處死時MHCC97II成瘤的重量是97Hezrin(L)的15倍。腫瘤病理切片顯示實驗組97Hezrin(L)腫瘤細胞的分裂相及病理分裂相較數(shù)量較對照組明顯減少。肺和淋巴結的病理切片顯示97