禽霍亂ptfa基因pcr檢測(cè)方法的研究

1、分類(lèi)號(hào)：學(xué)校代碼：10464UDC：研究生學(xué)號(hào)：201207294Z密級(jí)：碩士專(zhuān)業(yè)學(xué)位論文碩士專(zhuān)業(yè)學(xué)位論文禽霍亂ptfa基因PCR檢測(cè)方法的研究學(xué)位申請(qǐng)人：人：魏景利指導(dǎo)教師：師：宮強(qiáng)副教授合作教師：師：陳彥斌工程師專(zhuān)業(yè)學(xué)位類(lèi)專(zhuān)業(yè)學(xué)位類(lèi)別：別：農(nóng)業(yè)推廣碩士專(zhuān)業(yè)學(xué)位領(lǐng)域?qū)I(yè)學(xué)位領(lǐng)域：食品加工與安全2014年4月萬(wàn)方數(shù)據(jù)摘要I論文題目：文題目：禽霍亂禽霍亂ptfa基因基因PCR檢測(cè)方法的研究檢測(cè)方法的研究專(zhuān)業(yè)：業(yè)：食品加工與安全食品加工與安

2、全研究生：生：魏景利魏景利指導(dǎo)教師：指導(dǎo)教師：宮強(qiáng)摘要禽霍亂，又被稱(chēng)為禽出血性敗血癥或者禽多殺性巴氏桿菌病，是由多殺性巴氏桿菌引起的一種禽類(lèi)傳染病。多殺性巴氏桿菌對(duì)藥物和陽(yáng)光、干燥抵抗力不強(qiáng)，因此該病多發(fā)生于悶熱、潮濕的環(huán)境條件下，各種家禽，如雞、火雞、鵝、鴨等都可感染，且本病的發(fā)病率和死亡率都很高。家禽感染禽霍亂后，主要是采用抗生素治療，可能會(huì)導(dǎo)致禽肉制品中抗生素殘留量過(guò)高。目前，人們對(duì)禽霍亂的診斷，多數(shù)仍舊依據(jù)臨床癥狀和分離病原菌來(lái)

3、判斷，雖然這種傳統(tǒng)的方法能取得可靠的結(jié)果，但這些方法的工作量大，操作繁瑣，需要花費(fèi)較長(zhǎng)的時(shí)間，對(duì)禽霍亂爆發(fā)流行時(shí)的診斷和疾病控制都不利，因此急需研究一種快速、特異、敏感的診斷檢測(cè)方法。本實(shí)驗(yàn)以禽多殺性巴氏桿菌CVCC474菌株作為研究對(duì)象，提取該菌的基因組，根據(jù)GenBank中已發(fā)表的禽多殺性巴氏桿菌的ptfa的基因序列，設(shè)計(jì)和合成了一對(duì)特異性引物，建立了一種基于禽多殺性巴氏桿菌ptfa基因的PCR檢測(cè)方法，并對(duì)PCR反應(yīng)的退火溫度、循

4、環(huán)次數(shù)、引物濃度、Mg2濃度、dNTPs濃度五個(gè)反應(yīng)參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化，檢測(cè)了該方法的特異性和敏感性。結(jié)果成功擴(kuò)增出了禽多殺性巴氏桿菌435bp的ptfa特異性基因片段，而對(duì)雞致病性大腸桿菌、雞金黃色葡萄球菌和雞白痢沙門(mén)氏菌三種病原菌均未擴(kuò)增出相應(yīng)片段。敏感性試驗(yàn)結(jié)果表明本方法可檢測(cè)到最低1pgμL的禽多殺性巴氏桿菌基因組DNA。本試驗(yàn)為禽多殺性巴氏桿菌病快速檢測(cè)方法的研究奠定了一定的基礎(chǔ)，為我國(guó)禽肉制品的安全性作出一定的貢獻(xiàn)。關(guān)鍵詞：詞：禽