27333.國(guó)蘭constanslike基因的克隆與功能分析

1、CloningandFunctionanalysisofCONSTANSIikeGenesinCymbidiumByRuiXueTianSupervisor：ProfessorSong—JunZengAthesissubmittedfortheDegreeofMasterattheGraduateSchoolofTheChineseAcademyofSciencesMay2010心摘要國(guó)蘭CONSTANS1ike基因的克隆與功能分析摘要

2、國(guó)蘭通常是指蘭科蘭屬(Cymbidium)植物中的一部分地生種，包括墨蘭、建蘭、春蘭、寒蘭、蕙蘭、蓮瓣蘭和春劍，具有很高的觀賞價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值。為了解國(guó)蘭花期調(diào)控的分子機(jī)理，本研究分別從墨蘭品種“企劍白墨“(Cymbidiumsinense‘QiJianBaiMo’)和變種“秋榜”(Cymbidiumsinensevarhaematodes)、建蘭品種“金絲馬尾“(Cymbidiumensifolium‘JinSiMaWrei‘)、春蘭野

3、生種(Cymbidiumgoeringii)克隆到光周期調(diào)控途徑中的關(guān)鍵基因CONSTANSIike(coL)，并對(duì)其表達(dá)特性及功能進(jìn)行了初步研究。主要研究結(jié)果如下：1根據(jù)蘭科植物中蝴蝶蘭的肌動(dòng)蛋白(ACTIN)基因序列設(shè)計(jì)兩對(duì)跨內(nèi)含子引物，分別以cDNA第一鏈和基因組DNA為模板，采用RTPCR和PCR的方法從上述四種材料中分離出ACT基因片段。將企劍白墨、秋榜、建蘭和春蘭的ACT“?；蚱畏謩e命名為CsACTl、CsACT2、Ce

4、ACTl和CgACTl(GenBank登錄號(hào)分別為GUl81353、HM204766、GUl81354和GUl81355)。序列分析顯示：CsACTl和CgACTl均為1335bp，其中編碼區(qū)長(zhǎng)度均為1088bp，編碼362個(gè)氨基酸，包含3個(gè)內(nèi)含子；CsACT2和CeACTl均為1202bp，其中編碼區(qū)長(zhǎng)度均為1044bp，編碼348個(gè)氨基酸，包含2個(gè)內(nèi)含子。氨基酸序列的同源性分析顯示這四個(gè)基因片段的同源性非常高，達(dá)到97％以上；它們與

5、其它植物的肌動(dòng)蛋白基因也有較高的同源性，其中與蝴蝶蘭ACT的同源性最高，達(dá)96％以上。進(jìn)化樹(shù)結(jié)果顯示它們與蝴蝶蘭的ACT親緣關(guān)系最近，其次為禾本科植物的ACT。RTPCR表達(dá)分’析結(jié)果顯示，這四個(gè)基因在根、莖、葉、花梗、花蕾以及所有花器官中都有表達(dá)，且表達(dá)量一致，由此確定它們?cè)谄鞴僦惺墙M成型表達(dá)，可以作為基因表達(dá)調(diào)控研究中的內(nèi)標(biāo)參照。2采用RTPCR和RACE相結(jié)合的方法，首先從企劍白墨中克隆到COL基因，命名為CsCOLl(GenBa