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文檔簡介
1、隨著植物轉基因技術的發(fā)展,建立實用有效的無選擇標記遺傳轉化系統(tǒng),培育不帶選擇標記基因的轉基因作物已成為國際上植物基因工程的一個發(fā)展方向.為優(yōu)化該實驗室建立的雙T-DNA共轉化系統(tǒng)去除選擇標記基因的技術體系和建立新的水稻去除標記基因體系,該文研究了GFP和GFP-Hyg融合蛋白在水稻中的表達,初步探討了Cre/loxP系統(tǒng)在轉基因水稻中的刪除效率.通過農桿菌介導法獲得了4種攜帶mgfp4基因表達載體的水稻再生植株522個克隆,通過PCR、
2、Southern blot及后代遺傳分析,證明大部分外源基因以較低拷貝數(shù)整合進水稻基因組中;通過熒光觀察及RT-PCR檢測,表明了mGFP4在水稻中能表達,但其發(fā)出的綠色熒光檢測效果不甚理想;通過PCR分析,推測在低溫誘導啟動子(wcs)控制下,Cre基因可表達并實現(xiàn)外源基因的刪除.此外,該研究還建立了一種用NaOH處理法快速穩(wěn)定制備PCR模板的方法,該方法與常規(guī)CTAB法相比具有明顯的優(yōu)越性,對轉基因植物的大規(guī)模篩選與鑒定具有實際意義
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