日本囊對蝦兩種形態(tài)差異體形態(tài)性狀、生長特性和耐熱性比較研究.pdf

1、日本囊對蝦Marsupenaeus japonicus(Bate，1888)是我國沿海重要的經(jīng)濟養(yǎng)殖蝦類，依據(jù)其頭胸甲側(cè)部斜紋全延伸與否可分為兩種不同形態(tài)的差異體，二者地理分布不同并具較大遺傳分化。以兩類群體為材料，開展相關(guān)育種基礎(chǔ)研究，具重要現(xiàn)實意義。本文首先研究比較了兩種形態(tài)差異體群體生長特性，并通過多元分析確定影響其體質(zhì)量的主要形態(tài)性狀;其次，比較了二者的熱耐受性，并初步探討其耐高溫機理;同時，克隆了日本囊對蝦的HSP60基因并分

2、析其熱激時空表達，以期為更好開展日本囊對蝦養(yǎng)殖生產(chǎn)和相關(guān)遺傳育種提供實驗依據(jù)和理論參考。主要研究結(jié)果如下:
　　 1.室內(nèi)養(yǎng)殖環(huán)境下兩種形態(tài)差異體群體生長特性研究
　　 對室內(nèi)養(yǎng)殖環(huán)境下兩種形態(tài)差異體F1群體不同性別對蝦的體長和體質(zhì)量進行跟蹤測量，研究其生長特性及其規(guī)律。結(jié)果表明:日本囊對蝦體長和體質(zhì)量呈冪函數(shù)關(guān)系，兩群體雌、雄蝦其體長、頭胸甲長與體重的擬合參數(shù)b值皆近似為3，呈等速生長。擬合其von Bertallan

3、ffy生長方程為:形態(tài)差異體Ⅰ（♀）:Lt=15.932×[1-e-0.0067(t-26.5055)]，Wt=48.798×[1-e-0.0067(t-26.5055)]2.973;形態(tài)差異體Ⅰ（♂）:Lt=13.642×[1-e-0.0091(t-35.0053)]，Wt=30.437×[1-e-00091(t-35.0053)]2.969;形態(tài)差異體Ⅱ（♀）:Lt=13.865×[1-e-00077(t-22.8107)]，Wt=

4、31.449×[1-e-00077(t-22.8107)]3.103;形態(tài)差異體Ⅱ（♂）:Lt=12.094×[1-e-0.0102(t-32.6776)]，Wt=21.470×[1-e-00102(t-32.6776)]3.120。進一步分析其極限生長年齡和生長拐點日齡得出，雌蝦大于雄蝦，形態(tài)差異體Ⅰ對蝦大于形態(tài)差異體Ⅱ，表明前者最大體重高于后者而性成熟時間晚于后者。
　　 2.兩種形態(tài)差異體群體形態(tài)性狀對體質(zhì)量的影響效果分析

5、
　　 隨機選取室內(nèi)相同養(yǎng)殖環(huán)境下兩種形態(tài)差異體F1群體對蝦，分別測量24項形態(tài)指標(biāo)和體質(zhì)量(Y)性狀。比較兩群體各形態(tài)性狀與體長的比例參數(shù)發(fā)現(xiàn)，二者在體形上存在一定差異。相關(guān)分析和通徑分析結(jié)果表明，兩群體對蝦各形態(tài)性狀與體質(zhì)量的相關(guān)性均達到極顯著（P＜0.01）水平;形態(tài)差異體Ⅰ群體對蝦的體長(X1）、第一腹節(jié)寬(X11)、頭胸甲寬(X10)、第五腹節(jié)長(X7）、第三腹節(jié)長(X5）和第六腹節(jié)寬(X16)對體質(zhì)量直接影響顯著，形

6、態(tài)差異體Ⅱ群體則以體長(X1）、頭胸甲長(X2）、第五腹節(jié)寬(X15)和第一腹節(jié)寬(X11）對體質(zhì)量直接影響顯著;兩群體決定系數(shù)分析結(jié)果與通徑分析結(jié)果一致。經(jīng)顯著性分析，將偏回歸系數(shù)顯著的變量對體質(zhì)量建立多元回歸方程，形態(tài)差異體Ⅰ:Y=-23.789+1.525X1+5.183X10+10.889X11+5.671X7-4.066X5-4.054X16，形態(tài)差異體Ⅱ:Y=-20.533+1.476X1+4.759X11+1.573X2+

7、6.864X15，兩個方程的回歸關(guān)系均達到了極顯著水平(P＜0.01)。
　　 3.日本囊對蝦HSP60基因cDNA克隆與熱激表達
　　 基于已知物種HSP60同源保守序列設(shè)計特異性引物，克隆獲得日本囊對蝦HSP60 cDNA全序列。序列全長2376bp，包括5'-UTR80 bp，3'-UTR556bp和ORF1740bp。共編碼579個氨基酸，推測其分子量為61.08 kD，等電點(pI)為5.49。氨基酸序列同源比

8、對結(jié)果顯示具較高的保守性，基于氨基酸序列構(gòu)建的系統(tǒng)進化樹亦與傳統(tǒng)物種樹基本吻合。熒光定量PCR研究表明，正常情況下日本囊對蝦HSP60在血細胞、肝胰臟、心臟、鰓、胃、腸、肌肉和眼柄中均有表達，其表達程度在肝胰臟中最高，胃和眼柄中最低。熱激后HSP60在鰓、心、肝胰臟、胃和肌肉組織中的表達水平顯著(p＜0.05）上調(diào)。鰓和肝胰腺中HSP60基因在熱激后3h出現(xiàn)峰值，到12h時回落至正常水平。以上結(jié)果也證實了HSP60參與對蝦熱應(yīng)激反應(yīng)并在

9、抵御熱激過程中具有特殊作用，該基因熱激后的表達情況或許可作為衡量評價對蝦高溫耐受性能的一項指標(biāo)。
　　 4.兩種形態(tài)差異體群體耐熱性能及其機理研究
　　 比較兩種形態(tài)差異體群體高溫環(huán)境下生長與成活，96h亞致死溫度以及兩者在不同溫度下的CTMax值，結(jié)果表明，形態(tài)差異體Ⅱ群體耐高溫性能優(yōu)于形態(tài)差異體Ⅰ群體，并認為CTMax是較好的對蝦熱耐受性能評價指標(biāo)。機理探討分析認為，形態(tài)差異體Ⅱ群體較低的耗氧率和窒息點可以更大限度的