豬體細(xì)胞克隆及相關(guān)生物技術(shù)的研究.pdf

1、該文系統(tǒng)研究了豬體細(xì)胞核移植技術(shù)的相關(guān)環(huán)節(jié),并對(duì)其中的某些條件進(jìn)行了優(yōu)化.初步建立了相關(guān)的技術(shù)體系,為后期實(shí)驗(yàn)的開展奠定了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ).該實(shí)驗(yàn)建立了小香豬耳上皮細(xì)胞、胎兒成纖維細(xì)胞和榮昌豬耳上皮細(xì)胞、顆粒細(xì)胞三種體細(xì)胞細(xì)胞系.在實(shí)驗(yàn)中初步探索了在體外條件下對(duì)上述三種細(xì)胞進(jìn)行原代培養(yǎng)、傳代培養(yǎng)、細(xì)胞純化、細(xì)胞周期同期化處理及冷凍保存的方法.結(jié)果表明三種細(xì)胞的培養(yǎng)效果均與接種密度有關(guān).顆粒細(xì)胞對(duì)此尤為敏感,當(dāng)接種密度低于5×10<'4>/ml

2、時(shí),很難達(dá)到匯合期并繼續(xù)傳代.耳上皮的分生能力最強(qiáng),胎兒成纖維細(xì)胞則介于兩者之間.冷凍對(duì)細(xì)胞有損傷,解凍后有近50％的細(xì)胞死亡且第一次傳代時(shí)細(xì)胞的生活力明顯下降,表現(xiàn)為生長(zhǎng)速度降低,但在后續(xù)的傳代過(guò)程中可以恢復(fù).我們還通過(guò)脂質(zhì)體介導(dǎo)法獲得了轉(zhuǎn)綠色熒光蛋白(GFP-neo<'R>)基因的胎兒成纖維細(xì)胞系,并初步比較了不同濃度G418及篩選方法對(duì)細(xì)胞純化效果的影響.結(jié)果表明在一定范圍內(nèi)陽(yáng)性率隨基因量的增加而增加.傳代培養(yǎng)時(shí)間向培養(yǎng)液中添加3