基于鐵皮石斛EST-SSR標記開發(fā)的蘭科植物遺傳多樣性分析.pdf

1、蘭科植物有著極高的觀賞價值和經(jīng)濟價值,一直都深受人們的喜愛,蘭花產(chǎn)業(yè)已成為國際花卉業(yè)的重要組成部分。我國蘭花資源中一些種不但具有很高的觀賞價值,而且具有極高的藥用價值。由于過度開采,生境破壞而導致野生蘭花資源已瀕臨滅絕,因此對蘭科植物的研究和保護工作已刻不容緩。開展對對蘭科植物的系統(tǒng)進化研究,直接關系到對現(xiàn)有資源的有效評價和合理利用,也有利于優(yōu)質(zhì)新品種的培育,關乎整個產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。
　　 為了能在從分子水平對蘭科植物進行較全面的系

2、統(tǒng)進化研究,本研究首先對蘭科植物石斛屬中的代表種鐵皮石斛進行SSR標記的開發(fā),將標記用于石斛屬中驗證其通用性和多態(tài)性,然后將石斛EST-SSR標記擴展到蘭科植物材料中,為蘭科植物的遺傳多樣性等相關研究奠定基礎。
　　 (1)本研究首先對杭州師范大學“浙江省藥用植物種質(zhì)改良與質(zhì)量控制重點實驗室”構(gòu)建的鐵皮石斛cDNA文庫進行分析,對4075條EST序列進行搜索,得到了含有838個SSR位點的706條有效EST序列,最終成功開發(fā)11

3、0對EST-SSR引物。在所有EST序列中的SSR位點中,二、三核苷酸重復類型最多,分別為37.83％和42.96％,四核苷酸重復類型其次(12.53％);六核苷酸重復類型最少,僅占2.98％。
　　 (2)成功開發(fā)的110對鐵皮石斛EST-SSR引物,位于108個EST序列上,其中99條序列在GenBank數(shù)據(jù)庫中搜索到了基因功能注釋。將110對引物用于在31種石斛屬植物,進行了通用性及多態(tài)性分析,研究結(jié)果表明,石斛EST-S

4、SR在石斛屬通用性和多態(tài)性都很高,分別為47.93％和82.58％。
　　 (3)將本實驗室前期開發(fā)的金釵石斛EST-SSR與本研究開發(fā)的鐵皮石斛EST-SSR用于蘭科植物的研究,選擇其中在石斛屬中通用性＞50％的引物,對蘭科的15個屬44個材料進行通用性與多態(tài)性的分析,結(jié)果表明通用性偏低,為25.05％,多態(tài)性較好,為55.38％。;將其中有代表性的10對引物擴增結(jié)果進行測序,共獲得223條序列,對EST-SSR標記在蘭科植物