豬生物發(fā)酵床墊料中細菌群落結構動態(tài)變化研究.pdf

1、規(guī)?；酿B(yǎng)殖推動了我國農(nóng)業(yè)經(jīng)濟的發(fā)展，但是隨之帶來的環(huán)境污染問題也越來越引起人們的重視。發(fā)酵床養(yǎng)殖作為新型養(yǎng)殖技術，自從引入我國后，被大力地推廣和使用，為解決畜牧環(huán)境污染問題帶來了新希望。發(fā)酵床養(yǎng)殖技術的核心是墊料中微生物群落的活動，因此，近年來，生物發(fā)酵床微生物優(yōu)勢菌選育及微生物群落結構多樣性變化規(guī)律成為研究的熱點。
　　 本研究采用傳統(tǒng)培養(yǎng)法和RFLP技術對豬生物發(fā)酵床墊料內(nèi)的細菌群落結構動態(tài)變化進行研究，結果如下：

2、　　 1.微生物的分離鑒定試驗
　　 (1)采用傳統(tǒng)培養(yǎng)法，從發(fā)酵床樣品中分離了30株細菌17株放線菌。
　　 (2)對分離的菌株進行有機物(淀粉、蛋白質、油脂、纖維素)降解試驗，篩選出9株對有機物降解能力較強的菌株，其中細菌6株放線菌3株。
　　 (3)對6株高效細菌進行生理生化鑒定和16SrRNA鑒定，結果為枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)、嗜熱脂肪芽孢桿菌(Bacillus stearo

3、thermophilus)、地衣芽孢桿菌(Bacillus licheniformis)、蠟樣芽胞桿菌(Bacillus cereus)、粘質沙雷氏菌(Serratiamarcescens)和假單胞桿菌(Pseudomonas)；對3株高效放線菌進行了生理生化鑒定，初步判斷結果為鏈霉菌屬(Streptomyces)、螺孢菌屬(Spirillospora)、孢囊菌屬(Dactylosporangium)。
　　 2.RFLP技術分

4、析
　　 (1)基因組DNA的提取試驗：參照武亮(2010a)提供的蝸牛酶和蛋白酶雙重酶細胞裂解法分別對保育1年期(B1)、保育2年期(B2)、保育3年期(B3)、育成1年期(Y1)、育成2年期(Y2)、育成3年期(Y3)等豬生物發(fā)酵床6個樣品進行了微生物總基因組DNA的提取。瓊脂糖凝膠電泳片段大小約為21kp；測得DNA/RNA之比在1.6～1.8之間，DNA濃度在300ng/ul～400ng/ul之間。因此，用本方法提取豬生

5、物發(fā)酵床樣品的微生物總基因組DNA質量較高，可以進行后續(xù)的分子生物學研究。
　　 (2)通過酶切分型分析，從保育1年、2年、3年期樣品中，分別獲得28、20和15個序列類型；從育成1年、2年、3年樣品中分別獲得30、23和17個序列類型。
　　 (3)隨著使用年限增加，豬生物發(fā)酵床墊料中的微生物群落的多樣性有降低的趨勢。
　　 (4)生物發(fā)酵床樣品中，所獲得的序列歸到厚壁菌門、變形菌門和擬桿菌門中，分別占克隆子總