毛烏素沙地土壤生物結(jié)皮細(xì)菌多樣性分析與拮抗菌株5A5-3的篩選鑒定.pdf

1、本文以毛烏素沙地土壤生物結(jié)皮為研究對(duì)象,采用稀釋平板法統(tǒng)計(jì)了土壤生物結(jié)皮及結(jié)皮下土壤層各樣品的細(xì)菌生物量；根據(jù)平板菌落形態(tài)差異分離菌株,通過測(cè)定分離菌株的16S rDNA序列,進(jìn)行細(xì)菌種屬鑒定和種群多樣性分析。以分離到的細(xì)菌菌株為研究對(duì)象,通過對(duì)峙試驗(yàn)篩選得到對(duì)蘭花根腐病病原菌有較強(qiáng)拮抗作用的細(xì)菌5A5-3,并對(duì)5A5-3進(jìn)行了生理生化鑒定和16S rDNA序列分析。研究所得的主要結(jié)果如下：
　　 ⑴可培養(yǎng)細(xì)菌分離生物量數(shù)量級(jí)為

2、105,各取樣點(diǎn)結(jié)皮層樣品細(xì)菌生物量略高于土壤層,各方向隨距離變化所采集樣品分離到的細(xì)菌種類數(shù)和生物量變化沒有相一致的趨勢(shì)。生物結(jié)皮樣品分離到的細(xì)菌菌落表型豐富,共獲得190株菌落表型差異的細(xì)菌,結(jié)皮下土壤層樣品得到表型差異的細(xì)菌84株。
　　 ⑵獲得的274株細(xì)菌的16S rDNA有效序列測(cè)序后進(jìn)行BLAST比對(duì)分析,除5株與已報(bào)道的菌株序列相似性低于97％,其余均大于等于97％。根據(jù)序列相似性分析,生物結(jié)皮樣品中測(cè)序的186

3、株細(xì)菌劃分在60個(gè)分類單元,而土壤樣品中測(cè)序的83株細(xì)菌劃分在29個(gè)分類單元。生物結(jié)皮樣品的物種豐富度(S),Shannon-Wiener多樣性指數(shù)(H)和均勻度指數(shù)(D)分別為22.25±2.06,2.7016±0.0567和0.9081±0.0189,土壤樣品的物種豐富度(S),Shannon-Wiener多樣性指數(shù)(H)和均勻度指數(shù)(E)分別為13.00±2.45,2.3093±0.2037和0.8329±0.0735,其中生物結(jié)

4、皮物種豐富度(S),多樣性指數(shù)(H)和均勻度指數(shù)(E)分別都明顯優(yōu)于土壤樣品,而優(yōu)勢(shì)度指數(shù)(D)顯示土壤樣品高于結(jié)皮樣品。
　　 ⑶細(xì)菌種群多樣性分析表明,生物結(jié)皮樣品和土壤樣品分離到的細(xì)菌類群分布在厚壁菌門(Fimicutes),放線菌門(Actinobacteria),變形菌門(Proteobacteria)和擬桿菌門(Bacteroidetes)。芽孢桿菌屬(Bacillus)為所研究樣品的優(yōu)勢(shì)菌屬,在結(jié)皮和土壤樣品中的分

5、離頻率分別為86.84％和56.41％。四個(gè)主風(fēng)向不同距離采集的樣品多樣性顯示各采樣點(diǎn)細(xì)菌多樣性分布差異明顯。
　　 ⑷從生物結(jié)皮分離的菌株,有4株與數(shù)據(jù)庫(kù)里已報(bào)道的細(xì)菌相似性低于97％,土壤樣品中只分離出1株相似性低于97％的細(xì)菌,證明生物結(jié)皮有優(yōu)于土壤發(fā)現(xiàn)新型菌的潛力。并從分離到的274株細(xì)菌菌株中篩選到1株對(duì)蘭花根腐病病原菌尖孢鐮刀菌(Fusarium oxysporium)和串珠鐮孢菌(Fusarium monilifo