精子載體制備FecB轉基因太行山羊技術的研究.pdf

1、精子介導的基因轉移是指以精子作為外源基因的載體,在受精時將外源基因導入卵母細胞,使受精卵中含有外源基因,是目前轉基因動物研究中簡單而高效的方法之一。脂質體可用于轉基因的研究,利用脂質體可以和細胞膜融合的特點,將外源基因送入細胞內部。本實驗利用脂質體介導精子轉染的方法,研究了精子在介導基因轉移過程中精子與外源基因結合的影響因素,并對精子載體法制備FecB轉基因太行山羊進行了初步研究。試驗結果如下:
　　 1.精子充分離心洗滌后,再

2、與脂質體-DNA復合物混合,可顯著提高脂質體介導精子轉染外源DNA的效率。DNaseI消化前,洗滌組轉染精子陽性率為38％,而未處理精液組精子陽性率為14％；DNaseI消化后,洗滌組轉染精子陽性率為21％,而未處理精液組精子陽性率為5％,差異極顯著(P<0.01)。
　　 2.脂質體介導法可使外源DNA透過細胞膜內化進入精子胞質或胞核內,精子轉染外源DNA用DNaseI消化后能檢測到精子中外源DNA的存在。太行山羊精子與外源D

3、NA混合培養(yǎng)后,用熒光原位雜交檢測到18.3％的精子結合有外源DNA,脂質體Lipofectamine2000介導后比率增加至38.7％,兩法的統計學分析存在顯著性差異(P<0.01)。
　　 3.利用共培養(yǎng)法轉染外源DNA,用DNaseI消化后,能檢測到精子中外源DNA的存在,山羊精子具有自發(fā)的結合外源DNA的能力。
　　 4.對18只太行山羊母羊進行誘導發(fā)情處理,精子與FecB基因共孵育后,對發(fā)情母羊進行輸精,受孕率