擬南芥CBF3基因轉化文心蘭的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、本研究以文心蘭為試驗材料,優(yōu)化了文心蘭的再生體系。試驗結果表明:文心蘭原球莖在激素配比為MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.3mg/L+2％(W/V)蔗糖+0.6％(WN)瓊脂的培養(yǎng)基上,經過25d后可增殖形成大量原球莖,30d左右繼代1次,繼代原球莖增殖倍數(shù)約為4。原球莖材料經培養(yǎng)累積到一定量時,將所得的原球莖切塊接種到激素配比為MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L+5％(V/V)椰子水+2％(W/V)蔗糖+0.6％

2、(W/V)瓊脂的培養(yǎng)基上,有利于不定芽的分化。帶叢生芽的組織塊接種在1/2MS+IBA1.0mg/L+NAA0.1mg/L+10％(V/V)椰子水+2％(W/V)蔗糖+0.6％(W/V)瓊脂培養(yǎng)基上,15d后生根;25d后小苗基部可分化出長1cm左右的根,生根率達95％。
　　 通過基因槍法和農桿菌法分別轉化進行文心蘭的轉基因研究。
　　 測定了原球莖對Hyg的抗性。以抗寒基因CBF3為目的基因,利用農桿菌介導遺傳轉化法

3、,研究了預培養(yǎng)時間、侵染時間、共培養(yǎng)時間對農桿菌遺傳轉化率的影響試驗。結果表明:原球莖對Hyg的敏感濃度為30mg/L、預培養(yǎng)1d、農桿菌侵染原球莖最適時間為15min、共培養(yǎng)時間為2d有利于轉化率的提高。受體材料接種到MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L+Carb400mg/L培養(yǎng)基上進行脫菌培養(yǎng),15-20d繼代一次。2代后,轉接到MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L+5％(V/V)椰子水+Hyg30mg

4、/L培養(yǎng)基中進行抗性篩選。
　　 通過基因槍法進行轉化,研究預培養(yǎng)時間對轉化的影響,結果表明:最佳預培養(yǎng)時間為1d,最佳射程為6cm。延長培養(yǎng)10d后轉入MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L+5％(V/V)椰子水+Hyg30mg/L培養(yǎng)基上進行抗性篩選。
　　 對所獲得的轉化植株進行了PCR檢測及Southern印跡雜交鑒定。選取抗性植株進行PCR檢測,發(fā)現(xiàn)經農桿菌轉化的有5株呈陽性,將其擴繁,進行PCR檢

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