月見草Δ6-脂肪酸脫氫酶基因轉(zhuǎn)化油菜的研究.pdf

1、多數(shù)高等植物和動物中由于缺乏脫氫酶等相關(guān)酶系而不能合成C18以及超過C18的多不飽和脂肪酸,必須從特殊植物或微生物中獲得。利用生物技術(shù)將外源編碼相關(guān)脫氫酶的基因在油料作物中表達(dá),在控制種子中脂質(zhì)組成方面具有很好的發(fā)展前景。
　　 本研究以子葉節(jié)為外植體優(yōu)化了農(nóng)桿菌介導(dǎo)的甘藍(lán)型油菜品種秦油3號的遺傳轉(zhuǎn)化體系,分別探討預(yù)培養(yǎng)時間、菌液濃度、侵染時間、共培養(yǎng)時間、抗生素濃度及硝酸銀添加與否對轉(zhuǎn)化率的影響。在此基礎(chǔ)上,首次將來自月見草的

2、ΔA6-脂肪酸脫氫酶基因(Δ6-fatty acid desaturase gene,D6D)通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法導(dǎo)入油菜中,經(jīng)PCR檢測獲得了轉(zhuǎn)基因植株。主要結(jié)果如下：⑴子葉節(jié)的最佳預(yù)培養(yǎng)條件:MS+6-BA2.0 mg／L+NAA0.2 mg／L,培養(yǎng)2d；⑵侵染菌液的適宜濃度為 OD600=0.4,侵染時間為5 min,共培養(yǎng)時間為2d；⑶侵染后的外植體在含有慶大霉素的分化選擇培養(yǎng)基上培養(yǎng),初期篩選濃度為5 mg／L,一周后增加到10