辣椒NPR1基因克隆、載體構建及其轉化煙草的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、植物防御反應分子機制的研究是闡明植物抗病機制,進而進行植物抗病性狀有效的遺傳改良的基礎。前人大量的研究表明,由R基因介導的抗病反應在植物抗病中起關鍵性的作用,但不同植物R基因介導的抗病機制迄今仍不清楚。局部的ETI可以激發(fā)系統(tǒng)性的抗病反應SAR(systemic acquired resistance)。NPR1是SAR中的重要調節(jié)蛋白,其結構、功能及其與其它蛋白關系的分析有利于闡明SAR等R基因介導的抗病反應機制。為了獲得NPR1基因

2、超表達和RNA干擾的煙草轉基因突變體用于分析其在抗病反應中的作用及其與其它相關蛋白關系,本研究從辣椒cDNA文庫中篩選獲得一個NPR1全長cDNA,構建了其超表達載體和RNA干擾載體,分別轉化煙草獲得煙草轉基因植株。主要得出以下結論:
　　 1.從紫外處理的辣椒品種L-11葉片cDNA文庫中通過特異性引物PCR反應擴增獲得一個NPR1全長cDNA,長度約為1.8kbp,包含一個長度為582氨基酸的完整ORF(Open Readi

3、ng Frame),其中含有BTB、DUF、ANK、NPR1-like四個保守結構域。
　　 2.利用pDONR201、pk7WG2和pHELLSGATE12載體,通過Gateway載體構建技術構建了NPR1基因的超表達載體和RNA干擾載體,對這些載體進行測序驗證后利用農桿菌介導的遺傳轉化方法轉化煙草,獲得T0代超表達和RNA干擾煙草轉基因植株。
　　 3.對已獲得的煙草轉基因植株進行了DNA微量提取,利用特異性引物PC

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