獼猴桃抗?jié)儾』虻纳镄畔W分析.pdf

1、獼猴桃病害嚴重影響了獼猴桃的品質與產量，其中由丁香假單胞桿菌獼猴桃致病變種P.Syringae pv.actinidae(PSA)引起的獼猴桃細菌性潰瘍病是最重要的病害之一。本研究從獼猴桃的抗病基因入手，分析植物抗病基因的序列結構與其功能的關系，找到能輔助獼猴桃抗?jié)儾≈仓攴肿佑N的標記，結果如下:
　　1.以核苷酸結合位點(Nucleotide binding site，NBS)類基因保守序列，對‘紅陽’獼猴桃全基因組中所有96

2、條NBS-LRR類基因，利用Kiwifruit Genome Database、Pfam和Coils Server網站，和Bioedit、MEGA5.0、ClustalW軟件，分析確定‘紅陽’獼猴桃的NBS-LRR基因類型、結構和系統(tǒng)發(fā)育學關系。在‘紅陽’獼猴桃全基因組中共有96個NBS-LRR類基因，其中27條NBS-LRR類基因分布在基因簇內，可根據其結構進一步劃分為20類基因。并對NBS-LRR類基因家族進行了氨基酸多序列比對和系

3、統(tǒng)進化樹分析，發(fā)現整個NBS-LRR基因家族可分為三個亞家族。相對其它物種，紅陽獼猴桃NBS-LRR類基因總數少，缺少TIR結構，具有LRR結構的基因所占比重低，NBS結構不完整，這些特點可能與其感病性有關聯。
　　2.以易感獼猴桃潰瘍病品種‘紅陽’獼猴桃全基因組中所有數據為基礎，尋找到有可能存在獼猴桃抗?jié)儾』虻膬蓚€抗病基因家族Pto-like基因家族和NBS-LRR基因家族的基因序列，并基于該序列設計引物，以潰瘍病抗病品種‘

4、徐香’獼猴桃的全基因組DNA為模板進行PCR擴增，克隆并測序最終得到41條能夠通讀的不重復序列序列，分析其結構特點并與‘紅陽’獼猴桃的NBS-LRR基因序列結構進行對比分析，發(fā)現兩個品種的NBS-LRR基因中幾乎都沒有Tir結構域，且NBS結構域結構特點有一定差異:在構成NBS結構的8個結構域中，相比‘紅陽’獼猴桃，‘徐香’獼猴桃的NBS-LRR序列都具有更完整的Kinase2結構域，但是缺失RNBS-D結構和MHDVmotif結構比較

5、嚴重;總體上來說，‘徐香’獼猴桃的NBS結構域更為完整。
　　3.在‘紅陽’獼猴桃全基因組序列中國搜集整理得到NBS家族（共96條）和RLK家族（共261條）兩大抗病基因家族的序列，應用利用GRAMENE網站在線工具分析其結構，找到68對SSR位點，以此設計和篩選出最終產物在110-340bp，引物長度為18-22bp的引物，以17個品種獼猴桃全基因組DNA為模板擴增，最終篩選得到的兩對引物基本能夠在17個獼猴桃品種中表現出良好的