Graves病差異表達基因全長cDNA序列的克隆與生物信息學分析.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:在已獲得的Graves病差異低表達基因片段(EST：CF569048)的基礎上應用SMARTTMRACE技術獲得其全長cDNA序列(TGDRF12)。 　　方法:在本文前期運用抑制消減雜交技術(SSH)獲得Graves病差異低表達基因片段(EST：CF569048)的基礎上，對EST進行生物信息學分析，并應用SMARTTMRACE技術分別獲得Graves病差異表達基因的5'端和3'端，將測序結果去除載體后拼接成全長cDNA序列。

2、將獲得的全長序列到相關站點分析其閱讀框架、進行同源性比較和相關的生物學功能分析。并應用MultipleTissueNorthernBlot檢驗其在正常人多種組織的表達。將獲取的新序列利用Sequin程序進行登錄到Genbank。 　　結果:應用SMARTTMRACE技術成功獲得Graves病差異低表達基因的一條全長cDNA序列。此cDNA全長1620bp，開放閱讀框架318bp，5'非編碼區(qū)序列78bp，3'非編碼區(qū)序列1224bp，

3、共編碼106個氨基酸。MultipleTissueNorthernBlot檢驗其在正常人3種組織(胃、甲狀腺、腎上腺)中有較高表達，其中甲狀腺最高，且都只有一個轉(zhuǎn)錄本(1.6kb)，顯示大小為1.6Kb左右。同源性分析表明其與蛋白質(zhì)精氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶家族成員有很高的同源性。本文利用Sequin程序進行登錄，被GenBank收錄于Nr數(shù)據(jù)庫中(accessionnumber：AY786414)，見附錄四。 　　結論:通過應用SMARTTM

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