稻瘟病菌三個(gè)侵染表達(dá)上調(diào)基因的功能研究.pdf

1、稻瘟病菌(Magnaporthe oryzae)是目前研究絲狀真菌的重要模式生物。為了探索水稻與稻瘟病菌互作的分子機(jī)理，本文從稻瘟病菌全基因組基因芯片中挑選了三個(gè)該菌侵染水稻后表達(dá)上調(diào)倍數(shù)比較高的基因，對(duì)它們進(jìn)行基因敲除，同時(shí)對(duì)其中的兩個(gè)基因進(jìn)行過(guò)量表達(dá)，分析它們的表型變化，以初步確定它們?cè)诘疚敛【秩局虏∵^(guò)程中的作用。
　　 首先構(gòu)建了三個(gè)基因的敲除載體和MGG_06834.6與MGG_03891.6基因的過(guò)量表達(dá)載體，然后通

2、過(guò)原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化，獲得基因的缺失突變體和過(guò)量表達(dá)突變體。突變體表型分析發(fā)現(xiàn)，MGG_03356.6缺失突變體在菌落形態(tài)，孢子萌發(fā)，致病性方面與野生型沒(méi)有顯著差別，而在疏水性表面上附著胞形成率比野生型菌株KU70低；MGG_06834.6缺失突變體的表型與對(duì)照菌株也沒(méi)有明顯變化，但過(guò)量表達(dá)突變體的產(chǎn)孢量降低，且附著胞形成提前，而致病性減弱；MGG_03891.6的缺失突變體的表型與野生型菌株沒(méi)有顯著差別，但過(guò)量表達(dá)突變體的附著胞形成滯后，且

3、致病性也有所減弱。RT-PCR分析表明，MGG_06834.6和MGG_03891.6在野生型菌株中表達(dá)量很低。這些結(jié)果表明它們可能在稻瘟病菌侵染致病過(guò)程中充當(dāng)一定的作用。
　　 同時(shí)，我們利用SDS的脅迫來(lái)觀(guān)察細(xì)胞壁的完整性，實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，敲除MGG_03356.6和MGG_03891.6基因?qū)?xì)胞的完整性影響不明顯，而敲除MGG_06834.6基因后病菌對(duì)SDS抗性較弱，說(shuō)明細(xì)胞完整性減弱，因此MGG_06834.6可能是細(xì)