通過RNA干擾方法研究稻瘟病菌幾丁質酶家族基因的功能.pdf

1、幾丁質是真菌細胞壁的主要組成成分，幾丁質的分解合成影響細胞壁動態(tài)變化。真菌幾丁質酶通過分解幾丁質影響真菌形態(tài)建成,生長發(fā)育和致病毒力等。稻瘟病菌在菌絲生長，附著胞形成，芽管萌發(fā)，侵染擴展等生長階段都涉及細胞分裂分化，即與幾丁質酶相關。因此研究幾丁質酶基因功能有助于深入了解稻瘟病菌與水稻互作機制。
　　稻瘟病菌幾丁質酶家族基因有15個，可能存在功能冗余，通過基因敲除的方法研究其生物功能研究有一定難度。因此，本研究通過構建RNA干擾載

2、體，同時沉默多個基因，以分析稻瘟病菌幾丁質酶基因在致病過程中的作用。從預測的15個幾丁質酶基因中分別選擇60 bp的特異序列，串聯(lián)合成900 bp DNA片段，構建RNAi載體。將RNAi載體轉化稻瘟病菌原生質體獲得RN Ai轉化子。實時定量PCR的分析結果表明，RNAi突變體中多個幾丁質酶基因 mRNA轉錄水平下調。
　　幾丁質酶家族基因的功能分析結果如下：與野生型相比，RNAi突變體菌落生長速率略微降低，菌落黑色素減少，分生孢

3、子梗數(shù)與產孢量下降，孢子長寬比增加，萌發(fā)異常，且分生孢子萌發(fā)與附著胞形成略微延遲。同時，RNAi突變體菌絲細胞壁幾丁質分布有變化，細胞壁敏感性受到影響。盡管RNAi突變體的致病性沒有完全喪失，但侵染葉片的病斑顏色較淺，病斑數(shù)降低。幾丁質酶基因的沉默導致RNAi突變體生長發(fā)育和形態(tài)建成異常，不同突變體幾丁質酶基因沉默效率不一，引起RNAi突變體之間的表型有差異。
　　綜上所述，稻瘟病菌幾丁質酶家族基因共同參與調控菌絲的生長、產孢、幾