溶藻弧菌重要外膜蛋白免疫識別層次的研究.pdf

1、由于細菌耐藥性的危害逐步凸現(xiàn)，疫苗作為細菌性疾病的有效防治手段其優(yōu)勢不斷顯現(xiàn)，地位不斷提升。革蘭氏陰性菌作為病原菌的一個重要組成部分，對人類的生產、生活都具有很大的危害，運用免疫蛋白質組學的相關理論與方法，能夠高通量、高效率的篩選與鑒定革蘭氏陰性菌的外膜蛋白(outer membrane proteins，OMPs)中具有較強的免疫識別作用的顯性免疫原，可以通過對免疫原中和能力的比較評價最佳的疫苗候選靶位。 本論文克隆表達了4個

2、革蘭氏陰性菌中的重要致病菌種—溶藻弧菌的外膜蛋白，同時利用實驗室已有的22種溶藻弧菌外膜蛋白的克隆表達株共26個重要的溶藻弧菌的外膜蛋白，運用免疫蛋白質組學與基因工程等相關理論與技術，進行免疫原層次識別分析的研究。通過試驗論證了，在同等條件下，不同抗原對宿主具有不同強度的抗原反應，而且同時作用于宿主的抗原具有相互競爭與抑制的特征，發(fā)現(xiàn)了這26個溶藻弧菌重要外膜蛋白之間相互競爭與抑制的關系，初步構建了相應的免疫識別層次，為研制致病菌疫苗的

3、候選靶標提供了新的有效的途徑與方法，使細菌性疾病防治疫苗的研制更加有效、有針對性，因此具有非常重要的理論與現(xiàn)實意義。 本論文根據(jù)溶藻弧菌與副溶血弧菌的具有高度親緣關系，按GenBank中副溶血弧菌的基因序列，設計了4對外膜蛋白的基因引物，以溶藻弧菌基因組DNA為模板，采用PCR技術擴增獲得4個基因，進一步以pET—32a質粒為載體，構建出相應的4種重組質粒，在E.coliBL21菌株中進行表達。純化并定量了包括實驗室已有的22個

4、外膜蛋白共26個溶藻弧菌的重要外膜蛋白。 勾畫出26個溶藻弧菌重要外膜蛋白的免疫保護層次，第一免疫保護層次為：VA1440，VPA1745，VA2309，VPA1186，VA2241，VA1267，VA0741；第二免疫保護層次為：VA0449，VA0764，OmpV，OmpR，VPA0860，VA0802，VPA1615：第三免疫保護層次為：VA2265，VPA0225，VA0425。初步闡明26個溶藻弧菌外膜蛋白之間相互競爭