轉基因玉米寡核苷酸芯片檢測及鑒定技術的研究.pdf

1、轉基因玉米是目前全世界種植最多的4種轉基因作物之一，占轉基因作物總面積的22.5％。轉基因作物在給人類帶來巨大經濟效益和社會效益的同時，也引發(fā)了有關轉基因作物環(huán)境和食品安全性的激烈爭論，各國政府紛紛制定相關政策法規(guī)，加強對轉基因農產品的安全管理，開展轉基因生物檢測技術的研究。迄今為止，全球已有40余個國家和地區(qū)要求對轉基因食品實施標識管理。因此，轉基因植物的檢測技術尤其重要。篩選基因、目的基因、不同基因間的交聯結構基因和轉入基因與受體植

2、物間的轉化體特異結構基因檢測已成為轉基因檢測的主流。由于PCR技術簡單方便，曾被廣泛應用于轉基因檢測，但PCR檢測無法實現轉基因農產品高通量檢測?；蛐酒夹g的出現，實現了對樣品高通量檢測和篩選，特別是利用轉化體特異性芯片檢測技術檢測植物基因組與外源基因的連接區(qū)域具有特異性強，靈敏度高、自動化和高效率等優(yōu)點。
　　 本研究應用寡核苷酸芯片檢測技術，根據7種轉基因玉米Bt11、Bt176、Mon810、Mon863、TC1507、

3、GA21和NK603的重組DNA結構，進行檢測及鑒定，取得了以下結果。
　　 1、根據轉基因玉米重組DNA結構，利用Primer premier 5.0引物設計軟件設計轉基因玉米Bt11、Bt176、Mon810、Mon863、TC1507、GA21和NK603轉化體特異性引物，并進行了PCR檢測。結果表明，提取的DNA符合PCR擴增要求，轉基因與非轉基因模板DNA對每個目的片度的擴增都與預期結果一致。在此基礎上分別以玉米內參照

4、基因(ZSS(II)b)作對照，對Bt11、Mon810、TC1507和GA21、NK603、Bt176分別作兩對四重PCR反應。實現在同一個PCR反應管中同時對三種轉基因玉米及內參照基因的特異性檢測。
　　 2、根據轉基因玉米重組DNA結構，利用Primer premier 5.0和Oligo 6.0軟件分別設計和篩選了七種轉基因玉米轉化體特異性oligo探針，制備轉基因玉米的寡核苷酸芯片。結果表明，所產生的有效信號與預期結果

5、一致，與凝膠電泳檢測結果相符，表明所制備的寡核苷酸芯片特異性好。
　　 3、對常用PCR檢測法和芯片檢測法進行靈敏度檢測研究。PCR檢測與芯片檢測轉基因含量分別為0.1％、0.01％。結果表明:從檢測靈敏度進行評價，寡核苷酸芯片檢測要優(yōu)于PCR檢測。
　　 4、針對轉基因玉米檢測建立并優(yōu)化了一套三重PCR反應體系和兩套四重PCR反應體系，可在一張芯片上同時檢測多個相關基因。結合多重PCR技術可同時有效檢測及鑒定多種轉基因