轉(zhuǎn)基因家蠶絲腺生物反應(yīng)器表達(dá)hIGF-I的研究.pdf

1、家蠶絲腺是合成、分泌蠶絲蛋白的重要器官，具有作為生物反應(yīng)器的基本特點(diǎn)。為了實(shí)現(xiàn)人類胰島素生長(zhǎng)因子-I(hIGF-I)在轉(zhuǎn)基因家蠶細(xì)胞和絲腺組織中的表達(dá)，我們以家蠶絲膠基因啟動(dòng)子(Ser-1)驅(qū)動(dòng)人胰島素樣生長(zhǎng)因子(hIGF-I)，構(gòu)建了帶有家蠶桿狀病毒極早期基因啟動(dòng)子(ie-1)控制的新霉素抗性基因(neo)表達(dá)盒的轉(zhuǎn)基因載體pigA3GFP-ser-hIGF-ie-neo，在可表達(dá)轉(zhuǎn)座酶的輔助質(zhì)粒存在下，轉(zhuǎn)染BmN培養(yǎng)細(xì)胞，以700～

2、800μg/mL的G418篩選，獲得了穩(wěn)定轉(zhuǎn)化細(xì)胞系；ELISA檢測(cè)檢測(cè)結(jié)果顯示，5×105個(gè)細(xì)胞/ml MGF-I的表達(dá)水平約7.8×103Pg：轉(zhuǎn)基因載體pigA3GFP-Ser-hIGF-ie-neo通過精子介導(dǎo)導(dǎo)入蠶卵，利用neo、gfp基因的雙重篩選，經(jīng)過PCR和點(diǎn)雜交鑒定，獲得了轉(zhuǎn)基因家蠶，ELISA檢測(cè)結(jié)果顯示，在G1代hIGF-I在每克中部絲腺組織中的表達(dá)水平為2.44×103 pg。此外，用家蠶絲素Fhx/P25啟動(dòng)子