葡萄根瘤蚜氣味結合蛋白和化學感受蛋白的鑒定與組織分布研究.pdf

1、葡萄根瘤蚜(Daktulosphaira vitifoliae Fitch)，是全世界分布的葡萄害蟲，也是我國重要的檢疫性生物，以若蟲和成蟲吸取寄主植物汁液，引起葉癭或者根瘤，嚴重危害葡萄生產(chǎn)。嗅覺功能對昆蟲尋找寄主、選擇棲境、逃避不良環(huán)境至關重要。氣味結合蛋白(OBPs)和化學感受蛋白(CSPs)等嗅覺蛋白是昆蟲嗅覺活動的分子基礎。通過研究葡萄根瘤蚜的氣味結合蛋白和化學感受蛋白，可進一步研究葡萄根瘤蚜和寄主植物的關系，從而為進一步研究

2、葡萄根瘤蚜的防治提供新思路。據(jù)此，本研究利用葡萄根瘤蚜轉錄組，對葡萄根瘤蚜的氣味結合蛋白和化學感受蛋白進行了鑒定和序列分析，研究了這些嗅覺蛋白的組織分布。研究結果如下:
　　1.從葡萄根瘤蚜轉錄組中鑒定得到7個OBPs和7個CSPs基因。分別提取葡萄根瘤蚜全蟲、頭部和胸腹部的RNA，反轉錄合成cDNA，設計特異性引物，以全蟲cDNA為模板，通過PCR擴增獲得OBPs和CSPs基因的開放閱讀框。PCR產(chǎn)物經(jīng)純化、克隆到PMD-19t

3、克隆載體并測序。測序結果表明，我們成功獲得了7個葡萄根瘤蚜OBPs(DviOBPs)和7個葡萄根瘤蚜CSPs(DviCSPs)的開放閱讀框序列全長。
　　2.將得到的7個DviOBPs和7個DviCSPs分別與其他蚜蟲的OBPs、CSPs進行序列比對。DviOBP1、DviOBP2、DviOBP3、DviOBP4和DviOBP7具有6個保守的半胱氨酸位點，屬于Classical家族OBPs; DviOBP5和DviOBP6在第6個

4、保守半胱氨酸位點下游具有一個額外的保守半胱氨酸位點，屬于Plus-C家族OBPs。CSPs包含4個保守的半胱氨酸殘基。這些半胱氨酸殘基與二硫鍵的形成有關，能夠穩(wěn)定CSPs的空間結構，形成一個疏水性的空腔。
　　3.通過RT-PCR檢測了DviOBPs和DviCSPs在葡萄根瘤蚜頭部和胸腹部上的表達。結果表明，DviOBP1和DviOBP6在頭部大量表達，在胸腹部中的條帶較淺，DviOBP2、DviOBP3、DviOBP4、DviO