enJSRV及其受體HYAL2在蒙古綿羊子宮和胚胎中的表達(dá)與定位.pdf

1、在長(zhǎng)期進(jìn)化過(guò)程中整合于脊椎動(dòng)物基因組中的某些內(nèi)源性逆轉(zhuǎn)錄病毒，在胎盤(pán)形成過(guò)程扮演重要角色，起到增強(qiáng)遺傳基因功能，并保護(hù)宿主免受相關(guān)外源致病性病毒侵害的作用。綿羊基因組中含有與外源性綿羊肺腺瘤逆轉(zhuǎn)錄病毒（exogenous jaagsiekte sheep retrovirus，exJSRV）密切相關(guān)的約20拷貝內(nèi)源性逆轉(zhuǎn)錄綿羊肺腺瘤病毒（endogenous jaagsiekte sheep retrovirus，enJSRV）序列，其

2、中 exJSRV是綿羊肺腺瘤?。╫vine pulmonary adenomatosis，OPA）的致病因子，而透明質(zhì)酸酶2（hyaluronidase2，HYAL2）則是 enJSRV和exJSRV的共同受體。但enJSRV與其受體 HYAL2在綿羊胚胎發(fā)育過(guò)程中所發(fā)揮的確切作用仍不明了。
　　為了探索妊娠蒙古綿羊子宮和胚胎中是否存在 enJSRV和受體 HYAL2基因的表達(dá)及作用，本試驗(yàn)首先隨機(jī)抽取妊娠27d、56d、91d和

3、107d蒙古綿羊的子宮內(nèi)膜、絨毛膜、胎盤(pán)和胚胎為研究材料，采用半定量 RT-PCR技術(shù)進(jìn)行了初步探究。隨后設(shè)計(jì)特異性引物和Taq Man探針，建立了實(shí)時(shí)熒光定量 RT-PCR技術(shù)檢測(cè) enJSRV及其受體 HYAL2 mRNAs的方法，并運(yùn)用該方法比較系統(tǒng)地對(duì)enJSRV及其受體 HYAL2 mRNAs在不同妊娠時(shí)期（30d、50d、70d、90d、110d和130d）蒙古綿羊子宮內(nèi)膜、絨毛膜、胎盤(pán)和胚胎中的表達(dá)情況進(jìn)行了檢測(cè)分析。然后

4、分別將enJSRV及其受體 HYAL2的RT-PCR產(chǎn)物純化進(jìn)行地高辛探針的標(biāo)記，優(yōu)化組織原位雜交技術(shù)，并應(yīng)用該方法檢測(cè)了 enJSRV及其受體 HYAL2 mRNAs在不同妊娠時(shí)期（30d、50d和130d）蒙古綿羊子宮內(nèi)膜、絨毛膜、胎盤(pán)和胚胎組織的空間定位。
　　研究結(jié)果表明：
　　1．在妊娠27d、56d、91d和107d蒙古綿羊的子宮內(nèi)膜、絨毛膜、胎盤(pán)和胚胎中，均獲得了條帶單一的enJSRV及其受體 HYAL2擴(kuò)增片

5、段，且該片段與GenBank中的已登錄的綿羊 enJSRV和HYAL2同源性分別達(dá)到95.9％和98.3%。證實(shí) enJSRV及其受體 HYAL2 mRNAs在蒙古綿羊不同妊娠時(shí)期的子宮和胚胎組織中均有表達(dá)。因此，本項(xiàng)研究為深入探究 enJSRV及其受體 HYAL2在蒙古綿羊妊娠期的生殖生物學(xué)作用奠定了基礎(chǔ)。
　　2．蒙古綿羊在不同妊娠時(shí)期（30d、50d、70d、90d、110d和130d）子宮和胚胎組織中均有enJSRV mR

6、NA表達(dá)。通過(guò)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析得出：胎盤(pán)組織中 enJSRV基因的表達(dá)于90d時(shí)達(dá)到高峰，然后開(kāi)始下降，直至妊娠130d時(shí)表達(dá)量達(dá)到最低；子宮內(nèi)膜組織中 enJSRV mRNA的表達(dá)于30d和50d相對(duì)較高；絨毛膜組織中enJSRV mRNA的表達(dá)于妊娠50d時(shí)表達(dá)量最低，70d和110d相對(duì)較高。序列測(cè)定結(jié)果顯示，enJSRV基因片段與 GenBank中的已登錄的5種 enJSRV序列的同源性為100%。提示 enJSRV的表達(dá)與妊娠期子宮

7、內(nèi)的結(jié)構(gòu)變化和功能有關(guān)，為進(jìn)一步研究 enJSRV在妊娠蒙古綿羊子宮和胚胎組織細(xì)胞中的空間定位及生物學(xué)作用奠定了重要基礎(chǔ)。
　　3．蒙古綿羊在在不同妊娠時(shí)期（30d、50d、70d、90d、110d和130d）子宮和胚胎組織中均有HYAL2 mRNA表達(dá)。通過(guò)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析得出：HYAL2 mRNA于蒙古綿羊妊娠30d子宮內(nèi)膜和胎盤(pán)相對(duì)較高，于妊娠130d子宮內(nèi)膜、絨毛膜和胎盤(pán)相對(duì)較低。序列測(cè)定結(jié)果顯示，HYAL2基因片段與 GenB

8、ank中的已登錄的5種 HYAL2序列的同源性為91.9%。而 enJSRV與其受體 HYAL2 mRNA之間無(wú)線性相關(guān)性，這可能由于二者的表達(dá)調(diào)控機(jī)制不同所致。
　　4.應(yīng)用組織原位雜交技術(shù)檢測(cè)enJSRV及其受體 HYAL2 mRNAs在不同妊娠時(shí)期（30d、50d和130d）蒙古綿羊子宮內(nèi)膜、絨毛膜、胎盤(pán)和胚胎組織的空間定位，結(jié)果顯示，enJSRV及其受體 HYAL2 mRNAs的陽(yáng)性信號(hào)，出現(xiàn)于腔上皮細(xì)胞、腺上皮細(xì)胞、血管