葡萄ACO基因的克隆及其遺傳轉(zhuǎn)化的研究.pdf

1、葡萄作為一種重要的經(jīng)濟(jì)作物，其產(chǎn)量可占全球水果產(chǎn)量的25％，葡萄果實(shí)中含有極其豐富的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，因此常常用于制成果汁、葡萄干和葡萄酒等。但同時(shí)也由于葡萄易受到病蟲(chóng)害、機(jī)械傷害、生理失調(diào)和果實(shí)自身成熟等因素的影響，而導(dǎo)致其經(jīng)濟(jì)效益的損失。眾所周知，乙烯作為一種氣體植物激素，對(duì)植物的生長(zhǎng)發(fā)育以及植物對(duì)逆境脅迫的響應(yīng)具有重要的調(diào)節(jié)作用。在乙烯的生物合成途徑中，1-氨基環(huán)丙烷-1-羧酸氧化酶（1-aminocyclopropane-1-carbo

2、xylic acid oxidase，ACO）催化1-氨基環(huán)丙烷-1-羧酸(ACC)轉(zhuǎn)變成乙烯，它是乙烯合成途徑中最后一個(gè)限速酶，對(duì)乙烯的生物合成具有重要的調(diào)控作用。因此，對(duì)ACC氧化酶的研究就顯得極為必要。
　　本研究利用RT-PCR方法從葡萄中分離到了兩個(gè)ACO基因，并將其命名為VvACO1和VvACO2，其中VvACO1基因開(kāi)放閱讀框長(zhǎng)1020bp，共編碼339個(gè)氨基酸，VvACO2基因開(kāi)放閱讀框長(zhǎng)957bp，共編碼318個(gè)

3、氨基酸。對(duì)兩個(gè)ACO基因編碼的氨基酸序列分析表明均具有ACO家族的保守結(jié)構(gòu)域。多序列比對(duì)結(jié)果表明兩個(gè)ACO基因編碼的氨基酸序列與其他高等植物ACO的氨基酸序列具有較高的相似性。為了進(jìn)一步分析ACO基因的功能，將ACO基因正向插入植物表達(dá)載體pCAMBIA Super-1300中，構(gòu)建了ACO基因正義表達(dá)載體，以Micro-Tom番茄和Columbia型擬南芥為受體材料，利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的葉盤轉(zhuǎn)化法和蘸花法實(shí)現(xiàn)對(duì)番茄和擬南芥的遺傳轉(zhuǎn)化。使用