馬鈴薯PPase基因克隆及其遺傳轉(zhuǎn)化研究.pdf_第1頁(yè)
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1、本研究采用.RT-PCR技術(shù),從馬鈴薯栽培品種大西洋(Atlantic)葉片中克隆了PPase基因,分別構(gòu)建了組成型啟動(dòng)子CaMV 35S、塊莖特異表達(dá)啟動(dòng)子CIPP和低溫誘導(dǎo)表達(dá)啟動(dòng)子rd29A驅(qū)動(dòng)的反義PPase基因植物表達(dá)載體,然后采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化優(yōu)良馬鈴薯栽培品種,獲得了轉(zhuǎn)基因馬鈴薯。取得的主要研究結(jié)果如下: 1.從馬鈴薯栽培品種大西洋葉片中提取總RNA,用RT-PCR方法擴(kuò)增到馬鈴薯無(wú)機(jī)焦磷酸酶(PPase)基因c

2、DNA,序列分析結(jié)果表明該eDNA全長(zhǎng)673bp,開(kāi)放閱讀框架636bp,編碼211個(gè)氨基酸。該P(yáng)Pase基因已在GenBank中登記,登記號(hào)為EF091820。Blast同源性比較和分析表明,該cDNA與已發(fā)表的PPase基因(GenBank accession Z36894)同源性為97.62%。 2.采用酶切和連接的方法,構(gòu)建了強(qiáng)組成型啟動(dòng)子CaMV 35S、塊莖特異性表達(dá)啟動(dòng)子CIPP和低溫誘導(dǎo)表達(dá)啟動(dòng)子rd29A驅(qū)動(dòng)的

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