細菌感染的診斷和治療

1、細菌感染的診斷和治療,第一節(jié) 細菌感染的診斷,標本采集時應(yīng)注意無菌操作，盡量避免雜菌污染。根據(jù)不同疾病以及同一疾病不同時期采取不同標本。應(yīng)在使用抗菌藥物前采集標本，否則在培養(yǎng)時應(yīng)加入藥物拮抗劑。采集局部不得使用消毒劑。標本必須新鮮，采集后盡快送檢。盡可能采集病變明顯部位的材料。送檢過程中要采取適當(dāng)?shù)谋４娣绞健＃ɡ洳?、保溫、保濕、甘油緩沖液等）標本做好標記，寫明檢驗?zāi)康?、標本種類等。,一 標本的采集和送檢原則,二 病原菌的檢驗程

2、序,（一）病原學(xué)診斷（二）病原菌成分檢測（三）血清學(xué)診斷,1.細菌的形態(tài)結(jié)構(gòu)觀察2.分離培養(yǎng)3.生化試驗4.血清學(xué)試驗5.動物試驗6.藥物敏感試驗,（一）病原學(xué)診斷,大小、形態(tài)、排列、染色、及其有無特殊結(jié)構(gòu)程序：涂片 染色 鏡檢 (1)不染色標本的檢查 (2)染色標本的檢查,,1.細菌的形態(tài)結(jié)構(gòu)觀察,(1)不染色標本的檢查,不染色標本一般用于觀察細菌動力及運動情況(因為不染色標本直

3、接在普通光學(xué)顯微鏡下，無色透明,不能清楚看到細菌的形態(tài)與結(jié)構(gòu)特征,主要靠細菌的折射率與周圍環(huán)境不同進行觀察)。有鞭毛的細菌在鏡下呈活潑有方向的運動，無鞭毛的細菌則呈不規(guī)則布朗運動。 (不停地做無規(guī)則運動的現(xiàn)象),(2)染色標本的檢查,無色透明,直接不易觀察其形態(tài)結(jié)構(gòu);染料帶電荷;細菌的等電點在pH2-5之間,通常帶負電;常用的染色,,單染法,復(fù)染法,特殊染色法,a.單染法,簡單染色通常只用一種染色劑，使細菌整個細胞染上顏

4、色。常用染料:美藍、結(jié)晶紫或石碳酸復(fù)紅等堿性染料 因為看不清結(jié)構(gòu)。所以只便于檢查細菌的形態(tài)、大小和排列方式等。不能觀察其特殊構(gòu)造和屬性鑒定.,b.復(fù)染色法,用兩種或兩種以上的染料染色的方法，稱為復(fù)染色法或鑒別染色法 ①革蘭氏染色法:最經(jīng)典的方法②抗酸染色：是檢查結(jié)核分枝桿菌和麻風(fēng)桿菌的重要方法。,①細菌的革蘭氏染色法,革蘭氏染色是細菌鑒定上一個最重要和廣泛應(yīng)用的方法。染色步驟: 初染-媒染-脫色-復(fù)染理論和實際意義

5、 分為G+和G-細菌 了解細菌的致病性 指導(dǎo)臨床用藥,②抗酸染色,抗酸染色原理:分枝桿菌細胞壁含脂質(zhì)較多,其中主要成分為分枝菌酸,此物具有抗酸性,染色時與石炭酸復(fù)紅結(jié)合牢固,能抵抗酸性乙醇的脫色作用,因此抗酸菌能保持復(fù)紅的顏色,達到染色目的。步驟:苯酚復(fù)紅染色,加溫促使菌體著色;3%鹽酸乙醇脫色;呂氏美藍復(fù)染,未脫色細菌呈紅色為抗酸性細菌,脫色經(jīng)復(fù)染呈藍色的細菌為非抗酸性細菌。 只要用于結(jié)核桿菌和麻風(fēng)桿菌,c.特殊染

6、色,芽孢\鞭毛\莢膜等特殊結(jié)構(gòu)的觀察大多需特殊染色熒光染色法,2.分離培養(yǎng),分離培養(yǎng)：所有標本均應(yīng)作分離培養(yǎng)獲得純培養(yǎng)后進一步鑒定. 培養(yǎng)后根據(jù)菌落的大小、形態(tài)、顏色、表面性狀、透明度和溶血性做出初步判斷。,3.生化試驗：各種細菌所具有的酶不完全相同，對營養(yǎng)物質(zhì)的分解能力亦不一致，因而其代謝產(chǎn)物有別，藉此可對不同致病菌進行鑒別（如腸道桿菌） 4.血清學(xué)試驗：含特異抗體的免疫血清＋未知純種細菌進行血清學(xué)實驗，可確定致病菌的種和型。常

7、見有凝集試驗、沉淀反應(yīng)等。5.動物試驗：主要用于分離、鑒定致病菌，測定菌株產(chǎn)毒性等。 常用動物：小鼠、豚鼠、家兔 接種途徑：皮內(nèi)、皮下、腹腔、肌肉、靜脈等6.藥物敏感試驗：測定標本中致病菌對藥物的敏感程度。對指導(dǎo)臨床用藥及控制感染有重要意義。常用紙碟法和試管稀釋法。,1.抗原檢測：免疫學(xué)技術(shù)2.核酸檢測 (1)核酸雜交技術(shù)： 分為固相和液相。有原位雜交、檢測DNA的Southern

8、印跡，檢測RNA的 Northern印跡 (2)PCR技術(shù)：快速、靈敏、特異性強。 (3)DNA指紋：染色體和質(zhì)粒指紋或圖譜分析 (4)其它成分的檢測：利用氣液相色譜法檢測細菌的代謝產(chǎn)物等。,（二）病原菌成分檢測,（三)血清學(xué)診斷,用已知的細菌或其特異性抗原檢測患者體液中有無相應(yīng)特異性抗體和其效價的動態(tài)變化，可作為某些傳染病的輔助診斷。主要適用于抗原性較強的致病菌和病程較長的感染性疾病。常用有：直接凝集實驗、沉淀

9、實驗、補體結(jié)合實驗、中和試驗、ELISA等。,第三節(jié) 細菌感染的特異性防治,獲得性免疫的產(chǎn)生方式,一、人工主動免疫 概念：人工主動免疫是人為地將疫苗或類毒素接種于人體，使機體主動產(chǎn)生特異性免疫力的過程。是一種防治微生物感染的措施，主要用于預(yù)防。常用的人工自動免疫制劑有以下2種： (一) 疫苗 (二)類毒素,（一）疫苗 1 死疫苗： 用理化方法將免疫原性強的細菌殺死制成的。如百日咳、傷寒

10、、霍亂、斑疹傷寒、流行性腦膜炎、鉤端螺旋體病等 2 活疫苗： 用減度或無毒的病原體制成,如BCG、鼠疫和炭疽等的疫苗,活疫苗與死疫苗的比較 活疫苗 滅活疫苗 接種次數(shù) 1次 2-3次 接種量 小 較大 接種反應(yīng) 輕 重 免疫效果 較好,維持1-5年 差,維持0

11、.5-1年 毒力回升 有可能 不可能 安全性 有潛在危險性 安全性好 疫苗穩(wěn)定性 相對不穩(wěn)定 相對穩(wěn)定 保存 不易保存 易保存,,,3 基因工程疫苗 將編碼有效抗原組分的目的基因插入適當(dāng)載體,形成重組DNA, 再導(dǎo)入宿主細胞, 目的基因隨重組DNA復(fù)制而復(fù)制, 隨宿主細胞分裂而擴增, 使目的基因表達大量有效抗原成分, 由此制備的疫苗稱為基因

12、工程疫苗 如把HBsAg基因插入酵母細胞中，成功表達并制備HBsAg疫苗,4 亞單位疫苗 利用帶有細菌保護性免疫原的組分制成的疫苗。如肺炎鏈球菌莢膜多糖疫苗、鉤端螺旋體外膜蛋白疫苗等。 5 核酸疫苗或稱DNA疫苗、基因疫苗 是將能編碼引起保護性免疫應(yīng)答的病原體免疫原基因片段和質(zhì)粒載體直接注射入宿主體以表達目的免疫原，進而產(chǎn)生特異性體液免疫和細胞免疫的新型疫苗,6 治療疫苗 慢性復(fù)發(fā)性感染患者可

13、注射病原體疫苗以增強其免疫應(yīng)答，顯示不同程度的療效。疫苗與藥物起協(xié)同作用，促進康復(fù)，目前這一新領(lǐng)域正處于研究中。,（二）類毒素（toxoid）,類毒素是外毒素經(jīng)0.3-0.4%甲醛處理后，失去毒性仍保持抗原性的生物制品加入適量的磷酸鋁或氫氧化鋁等制成精制的類毒素在體內(nèi)吸收緩慢免疫效果較好。如白喉類毒素、破傷風(fēng)類毒素等,二、人工被動免疫 人工被動免疫：輸入含有特異性抗體免疫血清或制備好的免疫細胞，使機體立即獲得免疫力的過程，稱人

14、工被動免疫 可用于某些急性傳染病的應(yīng)急預(yù)防和治療，但維持時間短。常用的人工被動免疫制劑有： （一） 抗毒素 （二）抗菌血清 （三）胎盤丙種球蛋白和血清丙種球蛋白,三 其他免疫制劑 目前臨床常用的有以下幾種： ﹡干擾素 主要為INF-γ通過產(chǎn)生炎癥反應(yīng)和活化Mφ增強機體對胞內(nèi)寄生抗染的能力 ﹡IL-2 能刺激T細胞增殖 增強細胞免疫功能 ﹡集落刺激因子LAK細胞等 這些細胞免疫制劑在抗菌免

15、疫中應(yīng)用不多。主要試用于一些病毒性疾病和腫瘤,人工自動免疫和人工被動免疫的比較 區(qū)別要點 人工主動免疫 人工被動免疫 免疫物質(zhì) 抗原 抗體或細胞因子 接種次數(shù) 1-3次 1次 免疫出現(xiàn)時間 慢 2-4周 快 立即 免疫持續(xù)時間 長 數(shù)月-數(shù)年 短 2-3周 主要用途 預(yù)防

16、 治療或緊急預(yù)防,四 生物制劑的使用及注意事項 （一）接種對象： 根據(jù)發(fā)病的年齡、職業(yè)、流行地區(qū)確立接種對象 （二）接種途徑： 死疫苗、類毒素接種量大，常用皮下注射； 活疫苗接種量小，常用皮膚劃痕、皮內(nèi)注射、 口服及噴霧等； 丙種球蛋白、動物血清和抗毒素采用肌肉注射,（三）接種劑量、次數(shù)及間隔時間 死疫苗接種劑量大，常分2-3次注射，間隔時間隨免疫力建立情況而定，傷寒疫苗產(chǎn)生免

17、疫力快，間隔7-10天，類毒素吸收較慢，間隔3-4周。一般需1-2年后再接種一次 （四）接種反應(yīng)及預(yù)防接種禁忌癥 1.一般反應(yīng)： 2.異常反應(yīng)： 3.應(yīng)用生物制品的禁忌癥,五、細菌感染的治療,（一）抗菌藥物種類 1、抗生素（antibiotics) 2、化學(xué)合成藥物（二）抗菌藥物作用機制 1、影響細胞壁合成 2、影響細胞膜功能 3、