人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞靜脈輸注小鼠的安全性

1、人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞靜脈輸注小鼠的安全性人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞靜脈輸注小鼠的安全性何君12，李洋12，陳威12，郝好杰3，李名爍12，韓瑞紅12，武鑫12，盧星辰12，金翠英12，郭珣12，易輝12，李曉岑12，趙穎12，武巖12，徐玉環(huán)121.中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所，衛(wèi)生部人類(lèi)疾病比較醫(yī)學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京，1000212.中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院糖尿病研究中心，北京，1000053.解放軍總醫(yī)院生命科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)所，北京，100853【摘要

2、摘要】目的目的探討C57BL6J小鼠重復(fù)多次尾靜脈輸注人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞后的免疫反應(yīng)和毒性。方法方法將SPF級(jí)別的32只C57BL6J小鼠隨機(jī)分為陰性對(duì)照組、細(xì)胞移植組，每組16只，雌雄各半，細(xì)胞移植組小鼠尾靜脈注射分離培養(yǎng)的第5代人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞，一次5106只，每周注射一次，連續(xù)注射4周；陰性對(duì)照組每次注射相同容積的PBS。注射后后觀察小鼠的一般癥狀，末次注射后1周、4周進(jìn)行血細(xì)胞計(jì)數(shù)、血生化、免疫反應(yīng)指標(biāo)、臟器質(zhì)量測(cè)定和組織病理

3、學(xué)檢查。結(jié)果結(jié)果細(xì)胞移植組小鼠血細(xì)胞計(jì)數(shù)、血生化、臟器重量和臟器系數(shù)與對(duì)照組無(wú)顯著性差異（P0.05），臟器組織病理學(xué)在光鏡下檢查結(jié)果與對(duì)照組無(wú)形態(tài)學(xué)差別，以及免疫結(jié)果測(cè)定（T細(xì)胞亞群CD3、CD4、CD8及CD4CD8）與對(duì)照組無(wú)顯著性差異(P0.05)，較對(duì)照組有顯著性差異（P?0.01）。結(jié)論結(jié)論人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞重復(fù)多次尾靜脈輸注C57BL6J小鼠是安全可行的，對(duì)受者無(wú)明顯免疫反應(yīng)和毒副作用?！娟P(guān)鍵詞關(guān)鍵詞】人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞；

4、靜脈輸注；重復(fù)多次【中圖分類(lèi)號(hào)中圖分類(lèi)號(hào)】R332AsafetystudyofintravenousinjectionofhumanumbilicalcdmesenchymalstemcellsinmiceHEJun12LIYang12CHENWei12HAOHaojie3LIMingshuo12HANRuihong12WUXin12LUXingchen12JINCuiying12GUOXun12YIHui12LIXiaocen12ZH

5、AOYing12WUYan12XUYuhuan121.InstituteofLabatyAnimalScience，ChineseAcademyofMedicalScience，Beijing100021，China2.Diabetesresearchcenter，ChineseAcademyofMedicalScience，Beijing100005，China3.InstituteofBasicMedicineScienceColl

6、egeofLifeScienceChinesePLAGeneralHospital，Beijing100853，China[Abstract]Objective:TostudythetoxicityofintravenousinjectionofhumanumbilicalcdmesenchymalstemcellsinC57BL6Jmicewithrepeatedadministrations.Methods:32SPF實(shí)驗(yàn)動(dòng)物提供初

7、步的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。1材料和方法材料和方法1.1主要試劑及儀器主要試劑及儀器PEFITC標(biāo)記的大鼠抗小鼠CD4、CD8單抗，以及Percp標(biāo)記的倉(cāng)鼠抗小鼠CD3單抗均購(gòu)自BD公司；抗小鼠CD19單抗購(gòu)自eBioscience公司；抗小鼠IgG試劑盒（超敏二步法免疫組化檢測(cè)試劑）購(gòu)自美國(guó)GBI公司。FACSCalibur流式細(xì)胞儀(美國(guó)BD)、7100全自動(dòng)生化分析儀（日本日立）、PentraDX120全自動(dòng)血液分析儀（法國(guó)ABX）、OPTIP

8、HOT2顯微鏡（日本尼康）。1.2動(dòng)物來(lái)源及飼養(yǎng)動(dòng)物來(lái)源及飼養(yǎng)5～7周齡SPFC57BL6J小鼠購(gòu)自北京華阜康生物科技股份有限公司【SXK（京）20090004】，飼養(yǎng)于中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所新藥安全評(píng)價(jià)研究中心嚙齒類(lèi)動(dòng)物屏障設(shè)施【SYXK（京）20080012】，飼料經(jīng)60Co照射，飲用水及墊料均經(jīng)高壓消毒無(wú)菌處理，對(duì)小鼠的實(shí)驗(yàn)操作均于無(wú)菌超凈臺(tái)中進(jìn)行。1.3實(shí)驗(yàn)材料來(lái)源實(shí)驗(yàn)材料來(lái)源人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞由解放軍總醫(yī)院生命科學(xué)院

9、基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)所培養(yǎng)和制備成細(xì)胞懸液，使用前均經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測(cè)，細(xì)胞表面抗原符合間充質(zhì)干細(xì)胞的表型特征：CD34、CD45、CD73、HLADR、CD90、CD105。具體制備及表型檢測(cè)方法見(jiàn)該單位發(fā)表的文章[15]。1.4動(dòng)物分組及干細(xì)胞輸注動(dòng)物分組及干細(xì)胞輸注C57BL6J小鼠隨機(jī)分為細(xì)胞移植組、陰性對(duì)照組，每組16只，雌雄各半。收集培養(yǎng)的第5代人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞，采用PBS調(diào)整細(xì)胞濃度為2.51010L，細(xì)胞移植組每只小鼠尾靜脈注射0.

10、2ml次（即5106細(xì)胞只次），每周注射一次，連續(xù)注射4周；陰性對(duì)照組小鼠每只尾靜脈注射0.2mLPBS。1.5檢測(cè)指標(biāo)和方法檢測(cè)指標(biāo)和方法實(shí)驗(yàn)期間每天觀察一般癥狀；每周測(cè)定1次體重、攝食量。在末次輸注后1周、4周分別將兩組的一半小鼠禁食16h，從眼內(nèi)眥靜脈叢采集EDTA抗凝血進(jìn)行血細(xì)胞計(jì)數(shù)和外周血T淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)；采集血清進(jìn)行肝腎功能指標(biāo)測(cè)定；對(duì)動(dòng)物實(shí)施安樂(lè)死后，采集心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟、腦、胸腺、胰腺等進(jìn)行臟器稱(chēng)重（成對(duì)臟