細胞凋亡的幾種常見檢測方法

1、1細胞凋亡的幾種常見檢測方法細胞凋亡的幾種常見檢測方法細胞凋亡與壞死是兩種完全不同的細胞凋亡形式，根據(jù)死亡細胞在形態(tài)學、生物化學和分子生物學上的差別，可以將二者區(qū)別開來。細胞凋亡的檢測方法有很多，下面介紹幾種用流式細胞儀進行測定的方法。一、AnnexinVPI法在細胞凋亡早期位于細胞膜內(nèi)側的磷脂酰絲氨酸（PS）遷移至細胞膜外測。磷脂結合蛋白V（AnnexinV）是一種鈣依賴性的磷脂結合蛋白，它與PS具有高度的結合力。因此，Annexin

2、V可以作為探針檢測暴露在細胞外測的磷脂酰絲氨酸。碘化丙啶(propidineiodidePI)是一種核酸染料，它不能透過完整的細胞膜，但在凋亡中晚期的細胞和死細胞，PI能夠透過細胞膜而使細胞核紅染。因此將AnnexinV與PI匹配使用，就可以將凋亡早晚期的細胞以及死細胞區(qū)分開來。方法：1、懸浮細胞的染色：將正常培養(yǎng)和誘導凋亡的懸浮細胞（0.5~1106）用PBS洗2次，加入100ulBindingBuffer和FITC標記的Annexi

3、nV（20ugml）10ul，室溫避光30min，再加入PI（50ugml）5ul，避光反應5min后，加入3峰，但只能代表G0G1期發(fā)生凋亡，無法觀察S期和G2期發(fā)生的細胞凋亡。而且，細胞經(jīng)過固定后無法對活細胞和死細胞進行區(qū)分。Hoechst33342可以穿透細胞膜，進入正常細胞和凋亡細胞，與DNA結合，能在紫外線下顯示藍色熒光，而且染色后凋亡細胞熒光會比正常細胞明顯增強。PI不能穿透細胞膜，對于具有完整細胞膜的正常細胞或凋亡細胞不能

4、染色。而對于壞死細胞，其細胞膜的完整性喪失，PI可以穿透細胞膜使壞死細胞著色產(chǎn)生紅色熒光。Hoechst33342PI雙染后，可在流式細胞儀上將正常細胞、凋亡細胞和壞死細胞區(qū)別開來。在二元直方圖上，正常細胞對Hoechst33342具有拒染性，呈弱藍色熒和弱紅色熒光（Hoechst33342PI）；凋亡細胞對Hoechst33342具有嗜染性呈強藍色熒光弱紅色熒光（Hoechst33342PI）；壞死細胞對PI具有嗜染性，呈弱藍色熒光＋