昆蟲幾丁質(zhì)脫乙?；竍mcda1和ofcda1的性質(zhì)研究

1、碩士學(xué)位論文昆蟲幾丁質(zhì)脫乙酰基酶B m C D A l 和O f C D A l 的性質(zhì)研究B i o c h e m i c a l c h a r a c t e r i z a t i o no f t h e i n s e c tc h i t i nd e a c e t y l a s e sB m C D A l a n d O f C D A l學(xué) 號(hào)： 2 1 2 1 8 0 9 6完成日期： 2 0 1 5 年5

2、月大連理工大學(xué)D a l i a n U n i v e r s i t y o f T e c h n o l o g y大連理工大學(xué)碩士學(xué)位論文摘 要幾丁質(zhì)脫乙?；笇儆谔酋ッ? 家族，能催化幾丁質(zhì)的乙酰氨基水解生成殼聚糖。昆蟲幾丁質(zhì)脫乙酰基酶1 ( C D A l ) 主要在昆蟲蛻皮過(guò)程的表皮中表達(dá)，很可能參與新表皮中幾丁質(zhì)的裝配過(guò)程，因此具有重要的生理功能。本文以鱗翅目模式生物家蠶的B m C D A l 和農(nóng)業(yè)害蟲亞洲玉米螟的

3、O f C D A l 為研究對(duì)象，主要取得以下研究結(jié)果：1 ．利用P C R 分別調(diào)取了家蠶和亞洲玉米螟中的B m C D A l 和O f C D A l 基因。B m C D A l 和O f C D A l 的開放閱讀框分別為1 6 2 0 b p 和1 6 1 7 b p 。進(jìn)化分析表明，B m C D A l和O f C D A l 同屬于昆蟲G r o u p I 幾丁質(zhì)脫乙?；?，序列一致性高達(dá)9 6 ％，說(shuō)明鱗翅目昆蟲

4、C D A l 可能具有很高的保守性。與真菌及細(xì)菌來(lái)源的幾丁質(zhì)脫乙酰基酶一樣，序列分析表明兩者含有5 個(gè)與催化相關(guān)的保守基序。2 ．B m C D A l 的基因轉(zhuǎn)錄水平研究表明，在不同組織中，B m ∞爿J 在表皮中表達(dá)量最高；在不同發(fā)育過(guò)程中，B m C D A l 在蛹期表達(dá)量明顯升高。說(shuō)明該酶主要存在于表皮中并且在化蛹時(shí)發(fā)揮重要功能。注射蛻皮激素1 2h 后B m C D A J 表達(dá)量發(fā)生上調(diào)，說(shuō)明該基因的表達(dá)受蛻皮激素的調(diào)控

5、。3 ．選擇不同的表達(dá)系統(tǒng)對(duì)不同來(lái)源的C D A 進(jìn)行重組表達(dá)。在大腸桿菌中，B m C D A l 以包涵體形式表達(dá)，未能實(shí)現(xiàn)分離純化；在畢赤酵母中，B m C D A l 和O f C D A l能夠表達(dá)，甲醇誘導(dǎo)1 4 4 h 后，可以通過(guò)硫酸銨沉淀和金屬螯合層析兩步從發(fā)酵液上清中純化獲得重組蛋白。4 ．采用熒光胺法和3 ．甲基一2 ．苯并噻唑酮腙法對(duì)重組表達(dá)的C D A 活性進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果表明：B m C D A l 沒有檢測(cè)出