苦蕎苯丙氨酸解氨酶(PAL)基因遺傳多樣性及蕎麥提取物抑制非酶糖基化反應(yīng)的研究.pdf

1、苦蕎（Fagopyrm tatarium）是蓼科蕎麥屬的藥食兼用作物，是蕎麥的一個(gè)栽培種?？嗍w中富含黃酮類(lèi)化合物，苯丙氨酸解氨酶（PAL）是苦蕎黃酮合成途徑中的第一個(gè)酶，研究其基因的多樣性可為挑選高黃酮優(yōu)質(zhì)苦蕎種質(zhì)資源奠定基礎(chǔ)。
　　根據(jù)Genbank網(wǎng)站中公布的苦蕎苯丙氨酸解氨酶的基因序列，設(shè)計(jì)3對(duì)引物， PCR擴(kuò)增67份苦蕎材料PAL基因序列，對(duì)其進(jìn)行多樣性分析。結(jié)果表明：供試的67份苦蕎材料的PAL基因序列長(zhǎng)度為2011 b

2、p，其中，變異位點(diǎn)為160個(gè)，占序列總長(zhǎng)度的7.9％，簡(jiǎn)約信息位點(diǎn)為33個(gè)，占序列總長(zhǎng)度的1.64%。利用軟件比對(duì)材料的苯丙氨酸解氨酶基因序列，共檢測(cè)到46個(gè) SNP，頻率為1SNP/43.7bp。在PAL基因單核苷酸變異中，發(fā)生轉(zhuǎn)換是23個(gè)，顛換是23個(gè)。轉(zhuǎn)換與顛換的比值為1：1。
　　分析各地區(qū)苦蕎種質(zhì)資源的遺傳多樣性中，不同來(lái)源的苦蕎材料間的遺傳距離分布于0.002-0.016之間，來(lái)源于四川組的苦蕎材料種內(nèi)平均遺傳距離最大

3、（0.016），內(nèi)蒙古組的最?。?.002）。四川地區(qū)的材料與其它地區(qū)來(lái)源的材料間的遺傳距離位于0.010-0.014之間，而其他地區(qū)間的遺傳距離為0.004-0.013。67份苦蕎材料的平均π值和θ值分別為0.0034和0.0143。其中，四川材料的π值為0.0148。依據(jù)遺傳距離及分析核苷酸多樣性，均發(fā)現(xiàn)四川地區(qū)的苦蕎存在豐富的遺傳多樣性，這可能與中國(guó)西南部地區(qū)作為苦蕎起源地具有一定的關(guān)聯(lián)性。
　　依據(jù)PAL序列構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)

4、：本研究通過(guò)鄰接法構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)，將67份苦蕎種質(zhì)資源分為7組，這些聚類(lèi)結(jié)果顯示多數(shù)的苦蕎材料PAL序列之間差異較小，分類(lèi)與地理來(lái)源沒(méi)有關(guān)系。僅西藏地區(qū)的5份材料單獨(dú)聚為一組，比對(duì)結(jié)果發(fā)現(xiàn)其材料中具有較多的堿基轉(zhuǎn)換與堿基顛換的情況，說(shuō)明西藏的材料中可能是苦蕎PAL基因中稀有的SNP，是該基因中新的突變位點(diǎn)。
　　苦蕎已經(jīng)成為公認(rèn)的健康食品。尤其含有豐富的黃酮類(lèi)化合物，對(duì)糖尿病及其并發(fā)癥有重要的防治效益。本研究以BSA-GO反應(yīng)體系

5、模擬體外非酶糖基化反應(yīng)，比較蕎麥提取物和蘆丁、槲皮素、異槲皮素等黃酮類(lèi)化合物對(duì)非酶糖基化終產(chǎn)物AGEs的抑制效果。結(jié)果證明：抑制效果為蕎麥2＃醇提物>蕎麥1＃醇提物>鹽酸二甲雙胍>蕎麥水提物。抑制率最高的是蕎麥2＃醇提物，且蕎麥醇提取物對(duì)AGEs的抑制作用與三種黃酮類(lèi)化合物（蘆丁、槲皮素和異槲皮素）無(wú)明顯差異。由此可知蕎麥的乙醇提取物抑制AGEs形成的能力遠(yuǎn)高于市售的鹽酸二甲雙胍藥物，有望開(kāi)發(fā)出一種高效、無(wú)毒副作用的降糖藥物，或作為一種