膜結晶制備蛋白質晶體的傳質過程研究.pdf

1、隨著重組DNA技術的發(fā)展和表達體系的完善，已知的蛋白質數目有了很大增長。確定蛋白質結構的研究則紛紛提上日程，X射線衍射是確定蛋白質結構的最有效方法，而X射線結晶學的應用要求大分子晶體具有足夠大的尺寸（大于0．1mm）和完美的質量，以獲得精確的衍射數據。然而，許多生物大分子晶體常常難以成長，一般小分子結晶的方法都不適合于大分子的晶體生長。因此，獲得質量完美的蛋白質晶體成為蛋白質結構測定的主要瓶頸，需要探索新的結晶方法以制備蛋白質等生物大分

2、子晶體。用膜結晶技術結晶蛋白質可得到適合于衍射分析的大尺寸蛋白質晶體。 利用聚偏氟乙烯（PVDF）中空纖維膜對溶菌酶的靜態(tài)膜結晶過程進行實驗研究，考察了沉淀劑濃度、洗脫液濃度和結晶溶液蛋白質初始濃度對膜結晶過程的影響。結果表明：溶劑跨膜通量隨沉淀劑濃度的減小而增大；較高的洗脫液濃度在實驗開始階段引起較高的溶劑跨膜通量，而實驗過程中使溶劑跨膜通量下降較快；溶劑跨膜通量隨溶菌酶初始濃度的增大而減小。結合溶菌酶晶體的尺寸分布和晶體的

3、顯微鏡觀察，獲得最優(yōu)操作條件為沉淀劑NaCl濃度為4%（w/v），洗脫液MgCl2濃度為20%（w/v），溶菌酶初始濃度為20mg/ml。 對溶菌酶的動態(tài)膜結晶過程進行了研究，考察了結晶溶液和洗脫液流速對膜結晶過程溶劑跨膜通量和總傳質系數的影響。結果表明：各種操作條件下，溶劑跨膜通量和總傳質系數都是隨著實驗的進行而不斷減小，而且流速越大它們減小得就越快；流速較大時晶體尺寸小而數量多；流速較小時晶體數量少而尺寸較大，但容易出現(xiàn)損