簡介：腸易激綜合征IBS是一種以腹痛腹部不適伴排便習(xí)慣改變?yōu)樘卣鞯某Ｒ姷墓δ苄阅c病，其發(fā)作具有持續(xù)或反復(fù)的特點，缺乏形態(tài)學(xué)和生物化學(xué)改變的生物學(xué)標(biāo)志，腸道運動紊亂和內(nèi)臟感覺過敏被認為是其重要的病理生理改變。其發(fā)病率高，且發(fā)病以中青年為主，嚴重影響患者的生活質(zhì)量。該病病因和發(fā)病機制復(fù)雜，流行病學(xué)調(diào)查顯示，80％IBS患者中，應(yīng)激可造成IBS癥狀發(fā)作或加重，有精神創(chuàng)傷史者IBS發(fā)病率明顯高于健康人群，而長期的精神心理應(yīng)激刺激將對IBS產(chǎn)生直接致病作用。本研究探討應(yīng)激誘導(dǎo)IBS發(fā)生發(fā)展的生物學(xué)基礎(chǔ)及其損傷機制，為深刻認識IBS的病理生理機制、探索其臨床診斷與有效防治措施提供靶點和科學(xué)依據(jù)。一、母嬰分離應(yīng)激致腸易激綜合征的生物學(xué)特點新生期母嬰分離MS是一種早期負性生活應(yīng)激事件，可誘導(dǎo)出大鼠IBS主要病理特征即內(nèi)臟痛覺過敏和應(yīng)激時結(jié)腸運動加強。本研究選用SD新生大鼠，采用新生期母嬰分離方法建立應(yīng)激致腸易激綜合征大鼠模型，母嬰分離時間為PND（出生后天數(shù)）2PND21，每天分離3H。按照功能性疾病診斷方法，以大鼠行為學(xué)（曠場試驗和蔗糖水偏嗜度試驗反映動物精神活動）、大便性狀及排泄率（單位時間內(nèi)的動物排便粒數(shù)反映其胃腸道轉(zhuǎn)運功能）、結(jié)腸組織病理學(xué)和內(nèi)臟敏感性（結(jié)直腸擴張腹部回撤反應(yīng)壓力閾值反映動物內(nèi)臟敏感性）等疾病診斷標(biāo)準確認腸易激綜合征疾病動物模型的建立。結(jié)果顯示，與對照組相比，模型大鼠內(nèi)臟疼痛壓力閾值顯著下降，內(nèi)臟敏感性增強，急性應(yīng)激后腸道轉(zhuǎn)運加快出現(xiàn)糖水消耗量下降、探究行為減少及排便數(shù)量顯著增加等抑郁、焦慮樣行為學(xué)改變HE染色可見結(jié)腸各段組織結(jié)構(gòu)完整，未見病理學(xué)改變大鼠未見生長遲滯，新生期及成年后體重增長未見異常，符合IBS臨床表型特征，表明新生期母嬰分離應(yīng)激3H致IBS大鼠模型成功建立。對IBS大鼠生物學(xué)特點研究結(jié)果表明，新生期母嬰分離應(yīng)激致大鼠IBS樣癥狀存在性別差異，表現(xiàn)為雌鼠較雄鼠腸道敏感性增高更明顯，這與臨床女性發(fā)病率高于男性相似分離3H和分離45H的不同應(yīng)激時間對IBS大鼠癥狀嚴重程度未造成明顯影響單純分離和分離附加孤養(yǎng)的不同應(yīng)激類型對IBS大鼠癥狀嚴重程度亦未造成明顯影響。母嬰分離應(yīng)激致腸易激綜合征的生物學(xué)基礎(chǔ)的探索本研究選取母嬰分離應(yīng)激3H建立IBS大鼠模型，鑒于雌性動物涉及較多的變量因素且多不可控如激素周期的影響，選取雄性大鼠開展下列研究1母嬰分離應(yīng)激致腸易激綜合征的神經(jīng)內(nèi)分泌基礎(chǔ)采用ELISA方法分別檢測大鼠血漿GC、NE、ACH、5HT、CGRP、SP和GAS濃度。結(jié)果顯示，母嬰分離應(yīng)激致IBS發(fā)病過程中引起HPA軸和自主神經(jīng)系統(tǒng)異?；罨Ｐ痛笫笱獫{CT和ACH濃度較對照組顯著升高血漿SP、GAS和5HT水平輕度升高，CGRP濃度顯著升高。急性束縛應(yīng)激2H后，上述指標(biāo)均呈現(xiàn)持續(xù)而顯著升高。提示神經(jīng)內(nèi)分泌紊亂可能是應(yīng)激致IBS的生物學(xué)基礎(chǔ)。母嬰分離大鼠成年后上述神經(jīng)內(nèi)分泌激素持續(xù)高水平，表明早期生活事件引起神經(jīng)內(nèi)分泌長期異常，導(dǎo)致對應(yīng)激反應(yīng)的易感性。2母嬰分離應(yīng)激致腸易激綜合征的炎癥機制采用ELISA方法分別檢測大鼠血漿炎性因子TNFΑ和NO水平，可見模型大鼠血漿TNFΑ水平較對照組顯著升高，急性束縛應(yīng)激后進一步增加，且與對照應(yīng)激組有顯著差異而血漿NO含量明顯降低，急性應(yīng)激后進一步下降甲苯胺藍病理染色觀察可見結(jié)腸肥大細胞活化，結(jié)腸黏膜肥大細胞數(shù)目和脫顆粒比例較對照組增加，表明母嬰分離應(yīng)激致IBS發(fā)病過程中存在炎癥反應(yīng)。3母嬰分離應(yīng)激致腸易激綜合征的代謝機制采用代謝組學(xué)技術(shù)分析母嬰分離應(yīng)激致IBS大鼠血清內(nèi)源性代謝產(chǎn)物，定性分析發(fā)現(xiàn)早期應(yīng)激造成機體氨基酸、糖類及脂類共45種代謝產(chǎn)物發(fā)生異常改變，其中7種代謝分子包括絲氨酸、甘氨酸及纈氨酸等在母嬰分離組明顯增高，上述氨基酸參與腸道內(nèi)多種生物活性物質(zhì)的合成與調(diào)節(jié)，對維持腸黏膜完整性和腸道功能意義重大，表明母嬰分離應(yīng)激致IBS發(fā)病過程中機體形成腸易激綜合征易感的代謝模式。采用HPLC方法檢測血漿中HCY水平，發(fā)現(xiàn)模型大鼠血漿HCY水平顯著升高，急性應(yīng)激后進一步升高，出現(xiàn)HCY代謝異常，但早期應(yīng)激與成年后急性應(yīng)激的疊加效應(yīng)不明顯。代謝組學(xué)結(jié)果顯示，模型大鼠血漿絲氨酸含量顯著升高，絲氨酸是HCY轉(zhuǎn)硫代謝的關(guān)鍵底物，WESTERNBLOT顯示結(jié)腸組織HCY轉(zhuǎn)硫代謝酶胱硫醚Β合成酶CBS表達水平下降，表明在母嬰分離應(yīng)激致IBS進程中HCY轉(zhuǎn)硫代謝受到抑制，導(dǎo)致HCY代謝異常。應(yīng)激所致氨基酸等代謝模式異常可能是母嬰分離應(yīng)激致IBS發(fā)病的分子基礎(chǔ)。HCY作為前炎癥因子和免疫調(diào)節(jié)分子，其代謝異?？赡軉踊蚪閷?dǎo)了母嬰分離應(yīng)激所致IBS的病理過程。三、HCY在母嬰分離應(yīng)激致腸易激綜合征發(fā)病中的損傷機制1HCY是母嬰分離應(yīng)激致IBS發(fā)生的重要介導(dǎo)因子為了觀察HCY在母嬰分離應(yīng)激致IBS發(fā)生中的作用，本實驗采用外源性補充HCY代謝輔酶復(fù)合物（葉酸、維生素B6、維生素B12和甜菜堿復(fù)合水溶液）調(diào)節(jié)機體HCY水平，將IBS模型大鼠隨機分為兩組，一組給予HCY代謝輔酶MSVITB，一組給予水MS，灌胃體積2ML，連續(xù)7天對照組為不接受分離應(yīng)激大鼠，給予水灌胃。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，補充HCY代謝輔酶組大鼠血漿HCY水平較模型大鼠顯著降低，下降了30％，但仍略高于對照組HCY水平。伴隨血漿HCY水平的降低，IBS大鼠腸道內(nèi)臟高敏和轉(zhuǎn)運增強癥狀明顯改善，同時血漿炎性因子TNFΑ水平隨之降低，進一步確認HCY介導(dǎo)了母嬰分離應(yīng)激致IBS的發(fā)生。2HCY對母嬰分離應(yīng)激致IBS大鼠腸道屏障功能的調(diào)控為了探討HCY介導(dǎo)母嬰分離應(yīng)激致IBS的生物學(xué)機制，首先，通過三糖試驗觀察HCY對腸道通透性的影響。采用超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法LCMSMS測定尿液中不同時間段內(nèi)甘露醇、乳果糖和三氯蔗糖三種糖分子探針含量，發(fā)現(xiàn)灌服三糖分子水溶液后05H，各組大鼠尿液中甘露醇排泄量未見差別，模型大鼠乳果糖排泄量較對照組顯著增加，乳果糖甘露醇比值顯著增高，補充HCY代謝輔酶后明顯下降624H模型大鼠尿液中三氯蔗糖排泄量亦較對照組顯著增加，給予維生素后明顯降低，表明母嬰分離應(yīng)激致IBS進程中腸道細胞旁通透性增高，腸道上皮機械屏障功能受損，調(diào)節(jié)HCY水平后此損傷效應(yīng)明顯減輕。采用透射電鏡觀察HCY對結(jié)腸上皮緊密連接結(jié)構(gòu)完整性的影響，發(fā)現(xiàn)模型大鼠結(jié)腸上皮緊密連接結(jié)構(gòu)破壞，與對照組相比，緊密連接疏松、間隙增寬、密度降低，調(diào)節(jié)HCY水平后，結(jié)腸上皮細胞緊密連接結(jié)構(gòu)的完整性得以恢復(fù)。采用WESTERNBLOT和免疫熒光方法觀察HCY對結(jié)腸上皮緊密連接蛋白OCCLUDIN表達及分布的影響，發(fā)現(xiàn)模型大鼠結(jié)腸上皮緊密連接蛋白OCCLUDIN表達水平較對照組顯著減少，補充HCY代謝輔酶后表達量的降低有所減緩模型大鼠結(jié)腸黏膜上皮OCCLUDIN分布發(fā)生改變，陽性染色變淡，分布不連續(xù)，調(diào)節(jié)HCY水平后上述改變有所緩解，提示母嬰分離應(yīng)激致IBS進程中，結(jié)腸緊密連接受到破壞，導(dǎo)致結(jié)腸旁細胞通透性增加，出現(xiàn)上皮屏障功能障礙，調(diào)控HCY水平對母嬰分離應(yīng)激誘導(dǎo)的IBS模型大鼠腸黏膜屏障損傷具有一定的修復(fù)作用。表明HCY可能是通過損傷腸道緊密連接屏障進而介導(dǎo)了IBS的病理過程，而OCCLUDIN可能是HCY介導(dǎo)IBS的分子基礎(chǔ)。3HCY破壞緊密連接蛋白的作用機制為了進一步研究HCY對腸黏膜機械屏障功能的損傷機制，本實驗采用CACO2細胞建立體外結(jié)腸上皮細胞緊密連接模型，給予低濃度HCY（不造成細胞凋亡的濃度）與TNFΑ單獨或聯(lián)合干預(yù)24H，采用WESTERNBLOT和細胞免疫熒光技術(shù)觀察緊密連接蛋白OCCLUDIN表達和分布變化，結(jié)果顯示，HCY干預(yù)引起OCCLUDIN表達減少，OCCLUDIN蛋白由細胞膜頂端向細胞內(nèi)轉(zhuǎn)移，出現(xiàn)分布異常。提示HCY可直接破壞細胞間緊密連接結(jié)構(gòu)的完整性，引起細胞旁通路開放，造成腸道通透性增高，從而誘發(fā)炎癥反應(yīng)。即HCY單獨啟動了腸道上皮緊密連接的破壞，而不需要TNFΑ的介導(dǎo)作用。綜上所述，新生期母嬰分離3H應(yīng)激可導(dǎo)致IBS發(fā)生，發(fā)病特點具有性別差異，表現(xiàn)為與雄性大鼠相比，雌性大鼠對應(yīng)激更易感。應(yīng)激所致神經(jīng)、內(nèi)分泌、免疫炎癥及代謝調(diào)控網(wǎng)絡(luò)紊亂造成腸道黏膜損傷和防御機制失衡，腸道屏障功能下降，是母嬰分離應(yīng)激致IBS易感的病理生理基礎(chǔ)。HCY代謝異常是母嬰分離應(yīng)激致IBS的重要介導(dǎo)因子，其可通過改變腸道上皮細胞緊密連接蛋白OCCLUDIN水平和分布，引起腸道上皮細胞旁通透性增高，腸道上皮機械屏障功能受損，誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)，使腸道處于低度炎性環(huán)境，造成腸道感覺和運動功能異常，從而導(dǎo)致成年后IBS易感性增強，控制應(yīng)激機體HCY水平可有效降低IBS發(fā)生率。

簡介：（此頁插入獨創(chuàng)性聲明）（此頁插入獨創(chuàng)性聲明）重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文1英漢縮略語名詞對照英漢縮略語名詞對照英文縮寫英文縮寫英文全稱英文全稱中文全稱中文全稱ADAMTSADISINTEGRNANDMETALLOPROTEASEWITHTHOMBOSPNDINMOTIF腫瘤相關(guān)粘附分子QRTPCRREALTIMEQUANTITATIVEPOLYMERASECHAINREACTION實時熒光定量聚合酶鏈式反應(yīng)RTPCRREVERSETRANSCRIPTIONPOLYMERASECHAINREACTION逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反應(yīng)WBWESTERNBLOT蛋白免疫印跡法CCK8CELLCOUNTINGKIT8細胞計數(shù)試劑盒8FBSFETALBOVINESERUM胎牛血清FCMFLOWCYTOMETER流式細胞儀CRCHUMANCOLORECTALCANCER人結(jié)腸癌CSCALFSERUM小牛血清PBSPHOSPHATEBUFFERSALINE磷酸鹽緩沖液ODOPTICALDENSITY光密度值DMSODIMETHYLSULFOXIDE二甲基亞砜SDSSODIUMDODECYLSULFATE十二烷基磺酸鈉EDTAETHYLENEDIAMINETETRAACETICACID乙二胺四乙酸TSGTUMORSUPPRESSORGENE抑癌基因CDNACOMPLEMENTARYDEOXYRIBONUCLEICACID互補脫氧核糖核酸KBKILOBASE千堿基對VEGFVASCULARENDOTHELIALGROWTHFACTOR血管內(nèi)皮生長因子ADAMSADISINTEGRINANDMETALLOPROTEINASES去整合素金屬蛋白酶MMPSMATRIXMETALLOPROTEINASES基質(zhì)金屬蛋白酶DNADEOXYNUCLEICACID脫氧核糖核酸

簡介：分類號R7357UDC密級重慶醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文論文題目超聲靶向微泡介導(dǎo)超聲靶向微泡介導(dǎo)CD133SHRNA轉(zhuǎn)染對轉(zhuǎn)染對CD133肝癌肝癌干細胞干細胞生物學(xué)生物學(xué)特性及上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的特性及上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的影響影響作者姓名劉顏敏劉顏敏申請學(xué)位級別博士學(xué)科、專業(yè)名稱內(nèi)科學(xué)（消化內(nèi)科）內(nèi)科學(xué)（消化內(nèi)科）論文答辯年月2016年5月2016年5月指導(dǎo)教師姓名（職稱、單位名稱）吳小翎吳小翎教授教授重慶醫(yī)科大學(xué)第二臨床學(xué)院重慶醫(yī)科大學(xué)第二臨床學(xué)院目錄英漢縮略語名詞對照英漢縮略語名詞對照1中文摘要中文摘要3英文摘要英文摘要8論文正文論文正文超聲靶向微泡介導(dǎo)超聲靶向微泡介導(dǎo)CD133SHRNA轉(zhuǎn)染對轉(zhuǎn)染對CD133肝癌干細胞生物學(xué)特肝癌干細胞生物學(xué)特性及上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的影響性及上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的影響16前言前言16參考文獻參考文獻19第一部分第一部分超聲靶向微泡介導(dǎo)超聲靶向微泡介導(dǎo)CD133SHRNA增強增強CD133肝癌干細胞基因轉(zhuǎn)染的肝癌干細胞基因轉(zhuǎn)染的研究研究22前言前言221材料與方法材料與方法232結(jié)果結(jié)果373討論討論39參考文獻參考文獻44第二部分第二部分超聲靶向微泡介導(dǎo)超聲靶向微泡介導(dǎo)CD133SHRNA轉(zhuǎn)染對轉(zhuǎn)染對CD133肝癌干細胞增殖、侵肝癌干細胞增殖、侵襲能力的影響襲能力的影響46前言前言461材料和方法材料和方法462結(jié)果結(jié)果503討論討論52參考文獻參考文獻59第三部分第三部分超聲靶向微泡介導(dǎo)超聲靶向微泡介導(dǎo)CD133SHRNA轉(zhuǎn)染對轉(zhuǎn)染對CD133肝癌干細胞上皮間質(zhì)肝癌干細胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的影響及其分子機制轉(zhuǎn)化的影響及其分子機制61前言前言611材料與方法材料與方法622結(jié)果結(jié)果663討論討論67參考文獻參考文獻72全文總結(jié)全文總結(jié)75文獻綜述文獻綜述76參考文獻參考文獻87致謝94攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文95

簡介：分類號R73372UDC密級重慶醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文論文題目YAP對慢性粒細胞白血病慢性粒細胞白血病細胞細胞生物學(xué)效應(yīng)生物學(xué)效應(yīng)的影響影響及其及其機制研究機制研究作者姓名李會李會申請學(xué)位級別博士學(xué)科、專業(yè)名稱臨床檢驗診斷學(xué)臨床檢驗診斷學(xué)論文答辯年月2016年5月2016年5月指導(dǎo)教師姓名（職稱、單位名稱）馮文莉馮文莉教授教授重慶醫(yī)科大學(xué)檢驗醫(yī)學(xué)院重慶醫(yī)科大學(xué)檢驗醫(yī)學(xué)院臨床檢驗診斷學(xué)教育部重點實驗室臨床檢驗診斷學(xué)教育部重點實驗室重慶市市級重點實驗室重慶市市級重點實驗室目錄英漢縮略語名詞對照英漢縮略語名詞對照1中文中文摘要摘要3英文摘要英文摘要7論文正文論文正文YAP對慢性粒細胞白血病慢性粒細胞白血病細胞生物學(xué)效應(yīng)的影響及其機制研究細胞生物學(xué)效應(yīng)的影響及其機制研究13前言前言13參考文獻參考文獻17第一部分第一部分YAP在慢性粒細胞白血病慢性粒細胞白血病中的表達及中的表達及其與BCRABL的關(guān)系的關(guān)系211材料與方法材料與方法212結(jié)果結(jié)果303討論討論37小結(jié)小結(jié)39參考文獻參考文獻40第二部分第二部分YAP對慢性粒細胞白血病慢性粒細胞白血病細胞細胞株增殖和凋亡的影響及增殖和凋亡的影響及其機制其機制421材料與方法材料與方法422結(jié)果結(jié)果453討論討論51小結(jié)小結(jié)53參考文獻參考文獻54第三部分第三部分VP單獨或聯(lián)合單獨或聯(lián)合IM對K562細胞細胞致小鼠白血病能力致小鼠白血病能力的影響的影響571材料與方法材料與方法572結(jié)果結(jié)果603討論討論67小結(jié)小結(jié)69參考文獻參考文獻70全文總結(jié)全文總結(jié)72課題的創(chuàng)新之處課題的創(chuàng)新之處74課題不足及后續(xù)研究計劃課題不足及后續(xù)研究計劃75

簡介：目的1探討PGAM1在人不同類型睪丸組織中的表達及其臨床意義。2探討PGAM1在生精功能不良動物模型中的表達及其意義。3探討PGAM1的生物學(xué)功能及相關(guān)作用機制。方法1收集40例不同組織學(xué)類型的睪丸組織（生精功能正常10例，輕度生精功能不良10例，重度生精功能不良10例，唯支持細胞綜合征10例），經(jīng)固定、脫水制成石蠟組織塊，采用免疫組化檢測PGAM1在不同組織學(xué)類型睪丸組織中的表達情況，并分析PGAM1表達與臨床病理參數(shù)的關(guān)系。2收集8例不同組織學(xué)類型的新鮮睪丸組織標(biāo)本（生精功能正常2例，輕度生精功能不良2例，重度生精功能不良2例，唯支持細胞綜合征2例），經(jīng)組織研磨提取RNA，采用QRTPCR定量檢測PGAMMRNA表達水平，并分析其表達與臨床病理特征的關(guān)系。3挑選10只6W大的C57雄性小鼠，體重約為19～21G，隨機分為實驗組及對照組。其中，實驗組采用白消安30MGKG及二甲基亞砜DMSO進行腹腔單次注射，構(gòu)建生精功能不良的C57動物模型，對照組僅注射等體積的DMSO。注射后2W，全部處死小鼠，收集小鼠睪丸組織。睪丸組織經(jīng)脫水、包埋做成石蠟組織。石蠟組織經(jīng)切片、脫水及脫蠟后行蘇木素伊紅HE染色，觀察睪丸組織的形態(tài)學(xué)改變。同時，通過QRTPCR及WESTERNBLOT檢測實驗組及對照組睪丸組織中PGAM1的表達情況，分析睪丸生精功能與PGAM1表達的關(guān)系。4首先通過QRTPCR檢測PGAM1MRNA在小鼠精原細胞株GC1、小鼠精母細胞株GC2及支持細胞株TM4中的表達水平，然后通過SIRNA干擾技術(shù)瞬時轉(zhuǎn)染敲低GC1及TM4中PGAM1MRNA的表達水平，并通過QRTPCR及WESTERNBLOT進行驗證。5，通過MTT實驗分別檢測PGAM1表達下調(diào)對GC1及TM4細胞增殖能力的影響通過流式細胞儀分別檢測PGAM1表達下調(diào)對GC1及TM4細胞凋亡的影響通過劃痕實驗分別檢測PGAM1表達下調(diào)對GC1及TM4細胞運動能力的影響。6采用免疫組化及WESTERNBLOT檢測PGAM1表達下調(diào)后下游凋亡相關(guān)蛋白CASPASE6及CASPASE9、抗凋亡蛋白BCL2的表達水平，初步探討PGAM1的分子機制。結(jié)果1免疫組化檢測PGAM1在不同組織學(xué)類型睪丸組織中的表達免疫組化檢測結(jié)果表明PGAM1陽性表達于生精功能正常的睪丸組織，主要定位于精原細胞、精母細胞及支持細胞的胞核及胞質(zhì)中，而精子細胞中無明顯陽性表達。其中，在40例不同類型睪丸組織中，PGAM1在生精功能正常、輕度生精功能不良、重度生精功能不良及唯支持細胞綜合征中的高表達率分別為90％910，80％810，10％110，100％1010，組內(nèi)比較，差異具有明顯統(tǒng)計學(xué)意義P0000。然而，其表達與患者的年齡、睪丸體積、FSH、LH及T水平均無明顯相關(guān)P＞005。2QRTPCR檢測PGAM1在不同類型睪丸組織中的表達為進一步探討PGAM1表達與睪丸生精功能的關(guān)系，我們通過QRTPCR定量檢測了PGAM1在生精功能正常、輕度生精功能不良、重度生精功能不良及唯支持細胞綜合征睪丸組織中的表達水平，結(jié)果提示PGAM1MRNA水平在生精功能正常睪丸組織中的表達明顯高于重度生精不良，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義P0000。結(jié)果也顯示PGAM1MRNA水平與患者的年齡、睪丸體積、FSH、LH及T水平均無明顯相關(guān)P＞005。3PGAM1在生精功能不良動物模型中的表達為驗證白消安單次腹腔注射后，是否能影響睪丸的生精功能，我們通過HE染色觀察了實驗組與對照組睪丸的形態(tài)學(xué)改變。結(jié)果所示，對照組睪丸組織中的生精小管結(jié)構(gòu)清晰，生精小管內(nèi)生精細胞的排列及層次整齊，可見到大量成熟的精子集中于生精小管的中間管腔，提示DMSO注射并沒有影響睪丸的生精功能與對照組相比，我們發(fā)現(xiàn)在經(jīng)白消安注射后的實驗組小鼠睪丸組織中，生精小管發(fā)生明顯的變形，并出現(xiàn)萎縮，生精小管內(nèi)生精細胞排列紊亂，各級生精細胞（精原細胞、精母細胞、精子細胞及精子）均明顯減少，提示經(jīng)白消安注射后睪丸組織出現(xiàn)了明顯的生精功能不良，睪丸生精功能不良的小鼠動物模型構(gòu)建成功。隨后，我們通過免疫組化檢測了PGAM1的表達情況，結(jié)果顯示PGAM1在生精功能正常的睪丸組織中陽性表達于生精小管中的精原細胞、精母細胞、精子細胞及支持細胞的胞核及胞漿，同時也陽性表達于間質(zhì)細胞的胞核及胞漿。然而，PGAM1在生精功能低下的睪丸生精小管中的表達明顯減弱。QRTPCR定量檢測結(jié)果顯示PGAM1在生精功能不良的睪丸組織中的表達明顯低于對照組生精功能正常的睪丸組織，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜005）。同時，WESTERNBLOT定量檢測結(jié)果也顯示PGAM1在生精功能不良的睪丸組織中的表達明顯低于對照組生精功能正常的睪丸組織，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義P＜005。4PGAM1表達下調(diào)對GC1及TM4生物學(xué)功能的影響首先，我們通過QRTPCR定量檢測了PGAM1在小鼠精原細胞株GC1、小鼠精母細胞株GC2及小鼠支持細胞TM4中的表達情況，結(jié)果顯示PGAM1在GC1及TM4細胞株中的表達高于GC2。細胞免疫組化結(jié)果顯示PGAM1在GC1、GC2、TM4細胞株中表達主要定位于細胞質(zhì)，其中PGAM1在GC1及TM4細胞中的陽性表達強于GC2。同時，免疫熒光結(jié)果也表明PGAM1主要定位于細胞質(zhì)，PGAM1在GC1及TM4細胞中的陽性表達強于GC2細胞。隨后，為了進一步明確PGAM1的生物學(xué)功能，我們采用SIRNA干擾技術(shù)瞬時轉(zhuǎn)染敲低PGAM1MRNA在GC1及TM4細胞株中的表達水平，依據(jù)QRTPCR實驗篩選出干擾效果最佳的干擾片段進行后續(xù)實驗，并采用WESTERNBLOT進行驗證。結(jié)果表明針對PGAM1表達設(shè)計的三條干擾片段在GC1細胞中，下調(diào)PGAM1MRNA的水平分別為247％、780％、320％。其中，與對照組相比，干擾片段2的干擾效果最佳，差異明顯，具有統(tǒng)計學(xué)意義P0000。在TM4細胞中，三條干擾片段下調(diào)PGAM1MRNA的水平分別為110％、840％、313％。與對照組相比，干擾片段2的干擾效果也是最佳，差異明顯，具有統(tǒng)計學(xué)意義P0000。為此，我們選擇干擾片段2進行后續(xù)的研究。隨后，我們采用WESTERNBLOT分別檢測了干擾片段2在GC1及TM4細胞中對PGAM1的干擾效果，結(jié)果顯示經(jīng)干擾片段2轉(zhuǎn)染后，PGAM1表達明顯下調(diào)。為探討PGAM1表達下調(diào)對GC1及TM4細胞增殖能力的影響，我們進行了MTT實驗。結(jié)果表明在GC1細胞中，PGAM1表達下調(diào)后細胞的生長曲線較平緩，OD值明顯較低，提示PGAM1表達下調(diào)后GC1細胞的增殖能力明顯減弱P0000。同時，在TM4細胞中，PGAM1表達下調(diào)后，細胞的生長曲線與對照組相比，也較平緩，OD值明顯低于對照組，提示PGAM1表達下調(diào)后TM4細胞的增殖能力明顯減弱P0000。為探討PGAM1表達下調(diào)對GC1及TM4細胞凋亡能力的影響，我們采用流式細胞儀檢測了細胞的凋亡率。結(jié)果顯示對照組GC1細胞的凋亡為21％±05％，而PGAM1表達下調(diào)后GC1細胞的凋亡率為118％±15％，明顯高于對照組，差異明顯，具有統(tǒng)計學(xué)意義（P0000）。同時，對照組TM4細胞的凋亡為87％±24％，而PGAM1表達下調(diào)后GC1細胞的凋亡率為181％±39％，明顯高于對照組，差異明顯，具有統(tǒng)計學(xué)意義P0000。為探討PGAM1表達下調(diào)對GC1及TM4細胞運動能力的影響，我們進行了劃痕實驗。結(jié)果表明PGAM1表達下調(diào)后24H，TM4細胞的遷移距離明顯低于對照組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義P0000，提示PGAM1表達下調(diào)明顯抑制了TM4細胞的遷移。然而，PGAM1表達下調(diào)后24H，GC1細胞的遷移距離無明顯變化，差異無明顯統(tǒng)計學(xué)意義P0786，提示PGAM1表達下調(diào)明對GC1細胞的遷移能力無明顯影響。5PGAM1表達下調(diào)對下游凋亡相關(guān)蛋白表達的影響為探討PGAM1發(fā)揮生物學(xué)功能的潛在機制，我們通過WESTERNBLOT檢測了PGAM1表達下調(diào)后，凋亡相關(guān)蛋白CASPASE6及CASPASE9的表達情況，同時也檢測了抗凋亡蛋白BCL2的表達情況。結(jié)果表明，PGAM1表達下調(diào)后CASPASE6及CASPASE9表達均出現(xiàn)明顯上調(diào)，而BCL2表達出現(xiàn)明顯下調(diào)，提示PGAM1的表達下調(diào)激活了CASPASES及BCL2信號通路。結(jié)論1PGAM1陽性表達于生精功能正常的睪丸組織，其表達下調(diào)可能引起睪丸生精能力的減弱。2PGAM1表達與生精細胞的增殖、凋亡及遷移能力相關(guān)其中，PGAM1表達下調(diào)能明顯抑制GC1及TM4細胞的增殖，也能明顯抑制TM4細胞的遷移，同時有助于GC1及TM4細胞的凋亡。3PGAM1發(fā)揮生物學(xué)功能的機制與其表達下調(diào)激活了CASPASES及BCL2信號通路有關(guān)。

簡介：目的大量研究表明植物，尤其是傳統(tǒng)草藥學(xué)中的藥用植物可以被提取出有效成分用于臨床或科學(xué)研究使用，其中最有代表性的成果分別是我國科學(xué)家發(fā)現(xiàn)的青蒿素和外國研究人員分離的紫杉醇。這些植物的次生代謝產(chǎn)物雖然對植物自身生長并非絕對必要，但卻有著較高的潛在藥用價值，這與其往往作用于植物的天敵或競爭植物的功能相一致。近二十年，研究者們更進一步的把植物相關(guān)的糖類的藥用價值作為新的研究方向，尤以多糖的相關(guān)研究為多。已在多種經(jīng)典的傳統(tǒng)藥用植物中發(fā)現(xiàn)了有臨床價值的多糖。同時與藥用植物共生的微生物也可能是其有效成分的來源，這可能通過兩種機制來完成一種是微生物與植物的信息交流刺激藥用植物合成特定的次生代謝產(chǎn)物；另一種即微生物自身合成某些特殊的活性物質(zhì)。而在這些共生微生物中，植物內(nèi)生菌又是一個多樣性頗為豐富的類群，已經(jīng)有較多針對植物內(nèi)生菌的研究發(fā)表，并報道了一些其生物活性及潛在臨床應(yīng)用價值的發(fā)現(xiàn)。我國傳統(tǒng)藥學(xué)認為黨參具有補中益氣，健脾益肺之功效?，F(xiàn)代科學(xué)研究對黨參及其提取物的生物活性和臨床價值有一定的研究報道，其中包括抗疲勞，改善記憶能力，增強免疫系統(tǒng)某些功能，保護胃腸道黏膜等。而成分相關(guān)的研究主要集中在其多糖成分的研究上，而由于多糖自身的特性因而導(dǎo)致難以確定具體成分，所以無法確定具體有效成分的結(jié)構(gòu)。本課題組的合作者另辟蹊徑，分離了黨參的一種內(nèi)生菌（命名為14DS1），并提取了其胞外寡糖。結(jié)合我們課題組的專業(yè)方向，本研究主要從該胞外寡糖對免疫系統(tǒng)（具體而言為巨噬細胞）激活和血管新生的影響進行研究，以確定其是否有相關(guān)的生物學(xué)活性和潛在臨床價值。方法免疫相關(guān)部分主要以小鼠巨噬細胞系RAW2467為模型，研究14DS1胞外寡糖在體外對巨噬細胞的影響。具體實驗主要包括不同濃度處理下的形態(tài)學(xué)改變、TNFΑ在MRNA水平的表達（REALTIMEPCR）、GRIESS反應(yīng)（監(jiān)測NO分泌量）、吞噬能力測定、TRANSWELL實驗、微絲形態(tài)觀察和細胞粘附實驗等。血管新生相關(guān)部分主要使用HUVEC、HELA、A549和MDAMB231等細胞系。主要實驗包括體外成管實驗、劃痕愈合實驗、微管形態(tài)實驗、紡錘體形態(tài)與定位觀察、流式細胞分析等。結(jié)果在14DS1胞外寡糖處理下，形態(tài)學(xué)與TNFΑ表達量、NO分泌量等指標(biāo)均顯示細胞進入活化狀態(tài)，但其吞噬能力并未觀測到變化。細胞在TRANSWELL實驗中遷移能力也明顯升高，微絲也顯示出放射狀的纖維狀結(jié)構(gòu)，但普通的粘附實驗并無變化。高濃度該寡糖會抑制體外成管，抑制細胞遷移。對微管形態(tài)無明顯影響，細胞粘附實驗無明顯影響。處理組的紡錘體與基底面（玻片提供的培養(yǎng)平面）相對角度變大，處理組紡錘體定位偏移較對照組為大。藥物處理組細胞更高比例滯留于S期，高濃度組凋亡比例升高結(jié)論14DS1胞外寡糖可以在多個指標(biāo)上激活小鼠巨噬細胞系，同時影響其遷移能力和微絲形態(tài)，但不影響其吞噬能力和對膠原的粘附。對體外成管和傷痕愈合有一定影響。機制方面，已經(jīng)初步排除了其通過影響微管形態(tài)和膠原相關(guān)的粘附來實現(xiàn)上述效應(yīng)，但和微絲可能有一定關(guān)系。同時有證據(jù)表明其可對正常的紡錘體形成發(fā)生影響并促使細胞傾向于停滯于S期并提高凋亡率，提示可能影響紡錘體相關(guān)的精確調(diào)控和細胞周期中的DNA合成，這些是否與前述現(xiàn)象的背后機制有關(guān)，尚待進一步探討。

簡介：分類號R7302UDC密級重慶醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文論文題目腫瘤微環(huán)境中腫瘤微環(huán)境中HUCHUCMSCSMSCS的生物學(xué)特性分析的生物學(xué)特性分析作者姓名汪玲申請學(xué)位級別碩士學(xué)科、專業(yè)名稱臨床檢驗診斷學(xué)臨床檢驗診斷學(xué)論文答辯年月2016年5月2016年5月指導(dǎo)教師姓名（職稱、單位名稱）朱靜研究員研究員重慶醫(yī)科大學(xué)附屬兒童醫(yī)院重慶醫(yī)科大學(xué)附屬兒童醫(yī)院目錄英漢縮略語名詞對照英漢縮略語名詞對照1中文摘要中文摘要2英文摘要英文摘要7論文正文腫瘤微環(huán)境中論文正文腫瘤微環(huán)境中HUCMSCS的生物學(xué)特的生物學(xué)特性分析性分析14前言前言14第一部分第一部分腫瘤微環(huán)境中腫瘤微環(huán)境中HUCMSCS的生物學(xué)特性的生物學(xué)特性161材料與方法材料與方法162結(jié)果213討論254結(jié)論27參考文獻參考文獻28第二部分第二部分HUCMSCS在腫瘤微環(huán)境中生物學(xué)特性改變的分子機制研究在腫瘤微環(huán)境中生物學(xué)特性改變的分子機制研究301材料與方法材料與方法302結(jié)果363討論384結(jié)論41參考文獻參考文獻42第三部分第三部分SD大鼠大鼠C6腦膠質(zhì)瘤腦內(nèi)模型的建立及腦膠質(zhì)瘤腦內(nèi)模型的建立及大鼠大鼠BMSCS原位注射后的分原位注射后的分布觀察觀察441材料與方法材料與方法442結(jié)果483討論504結(jié)論51參考文獻參考文獻52全文總結(jié)全文總結(jié)54文獻綜述文獻綜述55致謝63攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表學(xué)術(shù)論文目錄攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表學(xué)術(shù)論文目錄64

簡介：上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院碩士畢業(yè)論文RAC1在胃癌中的表達及其參與調(diào)控胃癌生物學(xué)功能的研究在胃癌中的表達及其參與調(diào)控胃癌生物學(xué)功能的研究THEEXPRESSIONOFRAC1ANDITSREGULATIONOFBIOLOGICALFUNCTIONINGASTRICCANCER研究生姓名研究生姓名馮曉靜馮曉靜學(xué)號學(xué)號9127009102指導(dǎo)教師指導(dǎo)教師盧瑩導(dǎo)師組成員導(dǎo)師組成員余韻丁秋蘭丁秋蘭學(xué)科（專業(yè)）學(xué)科（專業(yè)）基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究方向研究方向胃腸道腫瘤基礎(chǔ)研究胃腸道腫瘤基礎(chǔ)研究申請學(xué)位級別申請學(xué)位級別醫(yī)學(xué)碩士醫(yī)學(xué)碩士培養(yǎng)單位培養(yǎng)單位上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院論文提交日期論文提交日期2016年4月關(guān)鍵詞關(guān)鍵詞RAC1、胃癌、轉(zhuǎn)移、腫瘤形成、、胃癌、轉(zhuǎn)移、腫瘤形成、預(yù)后預(yù)后上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院碩士畢業(yè)論文上海交通大學(xué)上海交通大學(xué)學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解學(xué)校有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留并向國家有關(guān)部門或機構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)上海交通大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存和匯編本學(xué)位論文。保密保密□，在年解密后適用本授權(quán)書。本學(xué)位論文屬于不保密不保密□。（請在以上方框內(nèi)打“√”）學(xué)位論文作者簽名指導(dǎo)教師簽名日期2016年4月1日日期2016年4月1日

簡介：研究目的探究MIRNA451對RF6A視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細胞的增殖、遷移及管腔形成能力等生物學(xué)特征的影響及其可能的機制，為增殖性糖尿病視網(wǎng)膜病變的治療提供理論基礎(chǔ)。方法1利用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將MIRNA451的類似物（MIMIC）和抑制劑（INHIBIT）轉(zhuǎn)染進RF6A細胞中，測定轉(zhuǎn)染效率。2將RF6A細胞分為四個組MIRNA451MIMIC組、MIRNA451MIMICCONTROL（類似物對照）組、MIRNA451INHIBIT組、MIRNA451INHIBITCONTROL（抑制劑對照）組，利用CCK8檢測細胞增殖能力，細胞劃痕實驗和TRANSWELL遷移實驗檢測細胞遷移能力，MATRIGEL管腔形成實驗觀察細胞形成管腔的能力。RTPCR檢測與生物學(xué)行為相關(guān)基因的表達情況。3以MIRNA451為研究對象，利用MIRBASE、MIRA、TARGETSCAN、PICTAR等數(shù)據(jù)庫對MIRNA451的作用靶點進行生物信息學(xué)分析，為實驗提供理論指導(dǎo)和依據(jù)。4利用SPSS190軟件對實驗結(jié)果進行統(tǒng)計學(xué)分析。組間的兩兩比較需要采用單因素方差分析（ONEWAYANOVA），P結(jié)果1轉(zhuǎn)染效率檢測的結(jié)果顯示，6H后MIRNA451MIMIC組在20UM時即有較高的轉(zhuǎn)染效率，MIRNA451INHIBIT組在80UM的轉(zhuǎn)染效率較高。2CCK8細胞增殖實驗結(jié)果顯示24H時，MIMIC組（1049±0020）較MIMICCONTROL組（1258±0034）低，結(jié)果有統(tǒng)計學(xué)差異（F0413，P0000）。48H時MIMIC組（1223±0077）較MIMICCONTROL組（1400±0037）低，結(jié)果具有統(tǒng)計學(xué)差異（F2401，P0002）。INHIBIT組與INHIBITCONTROL組相比較，24H時，兩組間無統(tǒng)計學(xué)差異（P005），48H時，INHIBIT組（1748±0023）較INHIBITCONTROL組（1689±0421）高，結(jié)果有統(tǒng)計學(xué)差異（F1407，P0000）。3劃痕實驗結(jié)果顯示MIRNA451MIMIC組與MIMICCONTROL組在觀察的時間段內(nèi)無統(tǒng)計學(xué)差異。6H時MIRNA451INHIBIT組（0106±0036）較INHIBITCONTROL組（0239±0030）低，結(jié)果有統(tǒng)計學(xué)差異（F0039，P0008），12H時MIRNA451INHIBIT組（0248±0045）較INHIBITCONTROL組（0445±0053）低，結(jié)果有統(tǒng)計學(xué)差異（F0227，P0008）。24H時無統(tǒng)計學(xué)差異（P4TRANSWELL結(jié)果顯示MIRNA451MIMIC組與MIMICCONTROL組在觀察的時間段內(nèi)無統(tǒng)計學(xué)差異（P5MATRIGEL管腔形成結(jié)果顯示MIRNA451MIMIC（60667±87369）組較MIMICCONTROL（16000±6000）組高，結(jié)果有統(tǒng)計學(xué)差異（F0688，P0002）。MIRNA451INHIBIT組（24667±3786）較INHIBITCONTROL組（65333±5033）低，結(jié)果有統(tǒng)計學(xué)差異（F0163，P0000）。6RTPCR結(jié)果顯示（1）CYCLINA1的表達，24H時MIMIC組（0424±0033）低于MIMICCONTROL組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（F15923，P0000），INHIBIT組（0042±0042）低于INHIBITCONTROL組，具有統(tǒng)計學(xué)差異（F14899，P0000）；（2）CYCLIND1的表達，24H時MIMIC組（0744±0105）低于MIMICCONTROL組，結(jié)果具有統(tǒng)計學(xué)差異（F5088，P0014），INHIBIT組同INHIBITCONTROL組間無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞005）；（3）PDGFRΑ的表達，24H時MIMIC組同MIMICCONTROL組間無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞005），INHIBIT組（1762±0285）高于INHIBITCONTROL組，結(jié)果具有統(tǒng)計學(xué)差異（F5549，P001）；（4）MMP2的表達在24H時，MIMIC組（0535±0084）低于MIMICCONTROL組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（F11495，P0001），INHIBIT組（0042±0016）低于INHIBITCONTROL組，具有統(tǒng)計學(xué)差異（F8910，P0000）。7生物信息學(xué)結(jié)果表明，MIRNA451主要參與調(diào)節(jié)細胞發(fā)育、負性調(diào)節(jié)細胞增生及多種酶活性等生物學(xué)過程（P結(jié)論1通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法，MIRNA451MIMIC和MIRNA451INHIBIT可以有效的上調(diào)或下調(diào)RF6A血管內(nèi)皮細胞中MIRNA451的表達。結(jié)果顯示抑制細胞中MIRNA451表達的結(jié)果更有意義。當(dāng)細胞中MIRNA451的表達降低時，增殖行為所受影響不大，細胞遷移受到抑制，形成管腔的能力下降，提示利用MIRNA451治療PDR具有潛在的可能性。2在下調(diào)MIRNA451表達水平后，CYCLINS、PDGFRΑ和MMP2變化的趨勢與細胞形態(tài)學(xué)的改變相吻合，提示CYCLINS、PDGFRΑ和MMP2可能參與MIRNA451作用RF6A細胞生物學(xué)行為的過程。其中，CYCLINS和PDGFRΑ可以反映細胞增殖能力，MMP2反應(yīng)細胞遷移能力。3MIRNA451對RF6A細胞的影響可能是經(jīng)由多種信號通路介導(dǎo)的復(fù)雜過程，將其作為治療靶點需要注意其可能出現(xiàn)的其他副作用。

簡介：高中生物學(xué)迷思概念轉(zhuǎn)變的教學(xué)設(shè)計實踐研究PRACTICERESEARCHONINSTRUCTIONALDESIGNFORCHANGINGMISCONCEPTIONSINSENIORHIGHSCHOOLBIOLOGY作者應(yīng)小義AUTHORXIAOYIYING申請學(xué)位類別和級別教育碩士APPLYFORDEGREETYPEANDLEVELMASTEROFEDUCATION學(xué)科專業(yè)學(xué)科教學(xué)生物PROFESSIONALDISCIPLINESDISCIPLINETEACHINGBIOLOGY學(xué)位授予單位浙江師范大學(xué)DEGREECONFERRINGUNITZHEJIANGNORMALUNIVERSITY指導(dǎo)教師陳秉初教授GUIDINGTEACHERBINGCHUCHENPROFESSOR論文提交日期2013年5月10日SUBMITDATEOFPAPERMAY10M，2013驗、類比、直觀教具等教學(xué)策略進行教學(xué)。在教學(xué)實踐后，對實驗班和對照班學(xué)生迷思概念情況進行測試，通過對結(jié)果的比較，分析概念轉(zhuǎn)變教學(xué)策略的有效性。研究結(jié)果顯示，學(xué)生普遍存在不同程度的迷思概念，不同學(xué)生之間又存在一定的差異。學(xué)生對有些概念的認識與科學(xué)概念一致，有些卻是片面的或是錯誤的。造成學(xué)生迷思概念的因素主要可以概括為三個方面日常生活經(jīng)驗及媒體因素、學(xué)習(xí)環(huán)境因素及個人認知因素。這些迷思概念極大地影響了學(xué)生對科學(xué)概念的學(xué)習(xí)。因此，教師在進行教學(xué)前，先了解學(xué)生迷思概念的情況，才能進行更有針對性的概念轉(zhuǎn)變教學(xué)。通過一個學(xué)期的教學(xué)實踐，分析比較實驗班和對照班學(xué)生的迷思概念轉(zhuǎn)變情況。結(jié)果顯示，實驗班學(xué)生的迷思概念水平低于對照班，兩者存在顯著的差異。由此可見，教學(xué)中運用概念轉(zhuǎn)變的教學(xué)策略，能明顯的降低學(xué)生的迷思概念水平，是一種有效的教學(xué)方式。關(guān)鍵詞高中生物學(xué)；迷思概念；概念轉(zhuǎn)變；教學(xué)設(shè)計II

簡介：上海交通大學(xué)碩士學(xué)位論文CXCL12參與神經(jīng)病理性疼痛交感芽生的細胞生物學(xué)機制碩士研究生徐江濤學(xué)號1137229371導(dǎo)師馬柯教授申請學(xué)位醫(yī)學(xué)科學(xué)碩士學(xué)科麻醉學(xué)研究方向神經(jīng)病理性疼痛的機制研究項目資助國家自然科學(xué)基金（NO81371246）所在單位新華醫(yī)院答辯日期2016年5月授予學(xué)位單位上海交通大學(xué)上海交通大學(xué)碩士學(xué)位論文ICXCL12參與神經(jīng)病理性疼痛交感芽生的細胞生物學(xué)機制摘要目的觀察CXCL12與其受體對原代培養(yǎng)的交感神經(jīng)元軸突生長的作用；討論其參與神經(jīng)病理性疼痛交感神經(jīng)軸突形態(tài)可塑性改變的相關(guān)機制；為臨床治療交感神經(jīng)維持性神經(jīng)病理性疼痛提示新靶點。方法極低密度原代培養(yǎng)SPRAGUEDAWLEY（SD）大鼠交感神經(jīng)元，免疫熒光染色檢測CXCR4受體與酪氨酸羥化酶（交感神經(jīng)元標(biāo)記物，TH）表達情況，激光共聚焦顯微鏡共定位受體表達。低密度原代培養(yǎng)SD大鼠、ICR小鼠交感神經(jīng)元，免疫熒光標(biāo)記CXCR4、CXCR7的表達，并進行計數(shù)。使用CXCL12干預(yù)極低密度原代培養(yǎng)SD大鼠交感神經(jīng)元，并設(shè)對照組，離體培養(yǎng)12小時后對全部神經(jīng)元軸突進行活細胞熒光染色，并對神經(jīng)元進行逐一拍照分析，測量每個細胞的軸突總長度和軸突分支點數(shù)量，并對神經(jīng)元進行SHOLL分析，觀察CXCL12對交感新生軸突生長的影響。結(jié)果本研究發(fā)現(xiàn)CXCR4和CXCR7都表達于大鼠交感神經(jīng)元上，在TH陽性神經(jīng)元上的共定位率均為100。原代培養(yǎng)小鼠交感神經(jīng)元也

簡介：目的近年來，由于抗生素的廣泛應(yīng)用導(dǎo)致一系列耐藥菌的不斷出現(xiàn)，如鮑曼不動桿菌、糞腸球菌、銅綠假單胞菌、結(jié)核桿菌等。細菌耐藥問題已經(jīng)成為全球抗感染領(lǐng)域關(guān)注的焦點問題，人類面臨再次步入“前抗生素”時代的可能。為此，本研究以革蘭陰性的多耐藥銅綠假單胞菌和鮑曼不動桿菌為對象，擬通過噬菌體裂解的方法，尋找新的可以對抗多耐藥菌感染的抗菌劑，為多耐藥菌臨床感染治療提供新的研究思路。方法以臨床上分離到的多耐藥銅綠假單胞菌、鮑曼不動桿菌為宿主菌，從環(huán)境中分離和鑒定針對這些耐藥菌的噬菌體。利用雙層瓊脂平板法和氯化銫不連續(xù)密度梯度離心法進行純化，電鏡觀察噬菌體的形態(tài)和大小，并測定其效價、宿主譜、酸堿穩(wěn)定性和熱穩(wěn)定性，繪制一步生長曲線、吸附曲線和感染曲線等。同時噬菌體經(jīng)過氯化銫不連續(xù)密度梯度離心法純化后抽取DNA并進行全基因組測序分析。結(jié)果分離到了1株銅綠假單胞菌噬菌體D204和1株鮑曼不動桿菌噬菌體D218。進一步對多耐藥銅綠假單胞菌噬菌體D204和多耐藥鮑曼不動桿菌噬菌體D218進行了全面的生物學(xué)特性和基因組序列分析研究。結(jié)果發(fā)現(xiàn)這兩株噬菌體均為烈性噬菌體。D204為短尾噬菌體，D218為長尾噬菌體。此兩株噬菌體均對PH及溫度的耐受范圍較寬，裂解宿主菌時吸附速率快、潛伏期短、裂解能力強、裂解量大?；蚪M測序結(jié)果表明D204基因組全長為50609BP，D218基因組全長102449BP。D204及D218基因組上均有一個溶菌酶編碼基因，同屬于溶菌酶類家族（CL00222）。

簡介：目的肺炎克雷伯菌的耐藥問題已對公共衛(wèi)生構(gòu)成重大威脅。尋找新的可能對付耐藥菌感染的方法已迫在眉睫。本課題通過對兩株耐藥肺炎克雷伯菌噬菌體的生物學(xué)特性和基因組學(xué)進行研究，為噬菌體用于耐藥肺炎克雷伯菌感染治療提供新的思路。方法以上海多家醫(yī)院臨床分離到的多耐藥肺炎克雷伯菌為宿主菌，從環(huán)境中分離肺炎克雷伯菌噬菌體，負染法電鏡觀察其形態(tài)及大小，并分析其對PH和溫度的穩(wěn)定性，測定最佳感染復(fù)數(shù)，繪制一步生長曲線、吸附曲線和感染曲線，并抽提噬菌體核酸進行測序及分析。結(jié)果分離得到了兩株耐藥性肺炎克雷伯菌的噬菌體KP002和KP004，電鏡確定均為有尾噬菌體。噬菌體KP002為肌尾科噬菌體，頭部直徑約70NM，尾長約80NM，尾寬約20NM。此株噬菌體在PH3～9及4～50℃的環(huán)境下具有較高活性，6分鐘吸附率達90％以上，潛伏期為10分鐘，爆發(fā)期90分鐘，裂解量為172PFUCELL。噬菌體KP002基因組為環(huán)狀雙鏈DNA，全長47173BP，GC含量為48。噬菌體KP004為短尾科噬菌體，頭部直徑約55NM，尾寬約20NM。此株噬菌體在PH3～9及4～50℃的環(huán)境下具有較高活性，6分鐘吸附率達95以上，潛伏期為20分鐘，裂解期為100MIN，裂解量為147PFUCELL。噬菌體KP004基因組為環(huán)狀雙鏈DNA，全長44，686BP，GC含量為53。結(jié)論本研究分離得到兩株針對耐藥肺炎克雷伯菌的烈性噬菌體KP002和KP004，兩株噬菌體對溫度及酸堿均具有較好的穩(wěn)定性。KP002基因組與已報道的噬菌體KP15，KP32，KP34和PHIKO2的基因組基本不具有相似性，與JD001的相似性為67，且編碼相同的2個噬菌體裂解酶（溶菌酶），同時，KP002也編碼一些特異的噬菌體相關(guān)的核酸內(nèi)切酶、DNA結(jié)合蛋白、DNA聚合酶及DNA解螺旋酶。KP004基因組預(yù)測編碼54個FS，與已報導(dǎo)的KP34和F19等基因組具有不同程度的序列相似。KP004基因組編碼1個溶菌酶基因，4個已知功能的特異編碼基因分別編碼噬菌體DNA聚合酶Ⅰ、噬菌體外殼和支架蛋白、噬菌體的尾鞘和甲基化蛋白Ⅰ。對這些特定結(jié)構(gòu)域的基因功能進行研究，可以為噬菌體應(yīng)用于臨床治療多重耐藥菌的感染提供新的研究思路。

簡介：目的在分子水平探討兔創(chuàng)傷后膝關(guān)節(jié)外源性攣縮的機制。方法建立新西蘭兔創(chuàng)傷后膝關(guān)節(jié)攣縮模型，以模擬人創(chuàng)傷后肘關(guān)節(jié)外源性攣縮。在模型中，3只骨骼成熟的新西蘭兔的左側(cè)膝關(guān)節(jié)經(jīng)手術(shù)造成關(guān)節(jié)內(nèi)骨折后予以固定作為實驗組，右側(cè)未做任何處理的膝關(guān)節(jié)作為對照組。使用AGILENT兔全基因芯片技術(shù)檢測關(guān)節(jié)囊中的基因表達譜，通過對比實驗組及對照組基因表達譜，篩選攣縮關(guān)節(jié)囊中差異表達的基因。在差異表達的基因中，選擇與纖維化相關(guān)的3個基因，基質(zhì)金屬蛋白酶2（MMP2、肌動蛋白Α2ACTA2、角化細胞生長因子KGF，采用REALTIMERTPCR進行驗證。結(jié)果通過比較攣縮關(guān)節(jié)囊與正常關(guān)節(jié)囊基因表達譜，篩選出90個顯著差異表達基因，其中表達上調(diào)21個，表達下調(diào)69個。這些差異基因在生化過程中主要參與調(diào)節(jié)外部的刺激反應(yīng)、調(diào)控脂多糖介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路及調(diào)節(jié)生物刺激反應(yīng)。在分子功能中主要參與離子及ATP結(jié)合。在細胞成分中主要參與構(gòu)成胞質(zhì)膜小泡。REALTIMERTPCR表明，MMP2、ACTA2及KGF基因的定量結(jié)果與基因芯片檢測結(jié)果一致，均表達上調(diào)。結(jié)論創(chuàng)傷后兔膝關(guān)節(jié)外源性攣縮模型中攣縮關(guān)節(jié)囊，與對照組相比，基因表達存在差異。MMP2及ACTA2的差異表達與已報道的人體研究結(jié)果一致，而KGF差異表達則在人體研究中未見報道。ACTA2、MMP2可能與創(chuàng)傷后關(guān)節(jié)外源性攣縮的發(fā)生有關(guān)，KGF在人關(guān)節(jié)攣縮中的作用有待進一步研究。

簡介：分類號密級碩士研究生學(xué)位論文論文題目（中文）乳腺癌新輔助化療前后生物學(xué)因子乳腺癌新輔助化療前后生物學(xué)因子表達變化的臨床研究表達變化的臨床研究論文題目（外文）CLINICALCLINICALRESEARCHRESEARCHOFOFCHANGECHANGEONONBIOLOGICALBIOLOGICALFACTSFACTS’EXPRESSIONEXPRESSIONBEFEBEFEAFTERAFTERNEOADJUVANTNEOADJUVANTCHEMETHERAPYCHEMETHERAPYININBREASTBREASTCANCERCANCER研究生姓名楊帆楊帆學(xué)科、專業(yè)臨床病理學(xué)臨床病理學(xué)研究方向腫瘤病理腫瘤病理導(dǎo)師姓名、職稱李長天李長天副教授副教授論文工作起止年月2014年8月至2016年2月論文提交日期2016年3月論文答辯日期2016年5月目錄摘要1ABSTRACT2前言5一、材料與方法711研究對象712化療前患者基本情況的評估713標(biāo)本的獲得814新輔助化療方案及治療方法815免疫組織化學(xué)染色816免疫組化染色結(jié)果判定917新輔助化療療效評價方法1018統(tǒng)計方法10二、結(jié)果1121新輔助化療的臨床療效評價1122化療前ER、PR的表達情況與療效的關(guān)系1223HER2的表達情況與療效的關(guān)系1224KI67的表達情況與療效的關(guān)系1325新輔助化療前后ER、PR的表達情況比較1326新輔助化療前后HER2的表達情況比較1427新輔助化療前后KI67的表達情況比較14三、討論16四、結(jié)論21參考文獻24綜述27參考文獻35致謝38附錄39