簡介：分類號密級單位代碼10422學號201013297∥戶蘩辦番SHANDONGUNIVERSITY博士學位論文L霄L_廣曼旦少匕入DISSERTATIOILFORDOCTORALDEGREE論文題目肝內腫塊型膽管細胞癌在影像學和分子生物學以及子富內膜癌在分芋生物學特征的研究IMAGINGANDMOLECULARLEA’TURESOFINTRAHEPATICFORM。CHOLAN霰IOCAREINOMSDMOLECULMASSRFORMINGCHOLANGIOCAREINOMASARFLOLEE1ARARFEATURESOFENDOMETRIALNCERFEATURESORECANCER作者姓名培養(yǎng)單位楊林醫(yī)學院專業(yè)名稱1影像醫(yī)學與核醫(yī)學指導教師合作導師劉慶偉2017年4月5日㈣2Ⅲ6Ⅲ8㈣4Ⅲ0刪3川3Ⅲ丫原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明所呈交的學位論文，是本人在導師的指導下，獨立進行研究所取得的成果。除文中已經注明引用的內容外，本論文不包含任何其他個人或集體己經發(fā)表或撰寫過的科研成果。對本文的研究作出重要貢獻的個人和集體，均己在文中以明確方式標明。本聲明的法律責任由本人承擔。論文作者簽名壺玨扛日關于學位論文使用授權的聲明本人完全了解山東大學有關保留、使用學位論文的規(guī)定，同意學校保留或向國家有關部門或機構送交論文的復印件和電子版，允許論文被查閱和借閱；本人授權山東大學可以將本學位論文的全部或部分內容編入有關數據庫進行檢索，可以采用影印、縮印或其他復制手段保存論文和匯編本學位論文。保密論文在解密后應遵守此規(guī)定論文作者簽名樅札導師簽名論文作者簽名型墜一導師簽名

簡介：2研究方向生塑堂教堂指導教師盒鲺羞副麴援申請人瑟四瀣2010年9月完成第1頁PROFESSIONALMASTERDE伊EETHESISEASTCHINANORSTUDYONTHEMODELOFLEARNINGPLAN一7I℃ACHINGINSENIORBIOIOGYTEACHINGDEP鋤MENTSCHOOLOFLIFESCIENCEMAJORMASTEROFEDUCATIONBIOLOGYSPECIALIZATIONBIOLOGYTEACHINGSUPERVISORASSOCIATEPROF1YUPEIFILNGNAMEZHANGSIHAICOMPLETEDINSEPTEINBER，201O，SHANGHAI第Ⅱ頁

簡介：第一部分退變腰椎間盤髓核組織SYNDECAN4蛋白的表達目的研究SYNDECAN4在退變的腰椎間盤髓核組織中的表達，探討其與腰椎間盤退變的關系。方法收集在骨科行腰椎后路減壓手術患者的椎間盤標本，共18例。所有標本按照PFIRRMANN椎間盤退變分級標準進行分級，退變程度在ⅣⅤ級的標本做為椎間盤退變組，共10例。退變程度在Ⅲ級的標本做為對照組，共8例。所有椎間盤標本分為兩份，一份置入液氮罐中保存，行RTPCR檢測，另一份甲醛固定后，行組織學切片檢測。結果免疫組織化學染色檢測發(fā)現，對照組及退變組的椎間盤組織均有SYNDECAN4蛋白的表達，但是退變組SYNDECAN4表達明顯高于對照組。退變組標本SYNDECAN4的平均光密度值也要高于對照組標本，差異具有統(tǒng)計學意義（P結論SYNDECAN4在退變程度較高的椎間盤內高表達，其可能參與椎間盤退變的過程。通過對SYNDECAN4的研究，可以為將來在分子生物水平上治療腰椎間盤退變提供參考。第二部分SYNDECAN4對人髓核細胞生物學行為的影響目的研究SYNDECAN4表達的變化，對于髓核細胞形態(tài)和增殖能力，以及對髓核細胞功能的影響，為后續(xù)細胞水平的椎間盤退變機制的研究提供實驗基礎。方法分別使用構建好的SYNDECAN4過表達和SYNDECAN4抑制病毒轉染人類髓核細胞株，用倒置顯微鏡對這些髓核細胞進行動態(tài)觀察，記錄細胞形態(tài)的不同變化。通過CCK8法分別檢測不同組別細胞的增殖情況。提取細胞總RNA和蛋白質，通過RTPCR和WESTERNBLOT檢測髓核相關功能因子等的MRNA和蛋白水平。結果不論在SYNDECAN4過表達以及抑制情況下，髓核細胞的形態(tài)并沒有出現明顯的變化。CCK8檢測顯示，SYNDECAN4的表達變化也沒有對于髓核細胞的增殖能力產生明顯影響。SYNDECAN4過表達后，AGGRECAN、COLLAGENII和SOX9的蛋白和MRNA水平均降低，而COLLAGENX蛋白及MRNA水平則表達升高。在SYNDECAN4抑制的情況下結果恰恰相反。結論SYNDECAN4的表達變化并不影響髓核細胞的形態(tài)和增殖能力，但可以影響髓核細胞的功能，參與了椎間盤髓核細胞的退變過程。SYNDECAN4的過表達可以促進髓核細胞的退行性改變。第三部分SYNDECAN4對JNKP53通路的影響目的研究SYNDECAN4對JNK通路以及下游的P53通路的影響，以及在髓核細胞退變過程中發(fā)揮作用。方法在SYNDECAN4過表達和抑制的髓核細胞株檢測JNK及PJNK蛋白的水平，以及P53蛋白及其靶基因MDM2和P21的水平。通過外源性的過表達P53以及阻斷JNK通路，抑制P53的表達，觀察髓核細胞的相關功能因子的改變。結果SYNDECAN4過表達能顯著增加JNK蛋白的磷酸化水平和總表達水平，而抑制SYNDECAN4則能明顯降低其表達水平。同樣地，SYNDECAN4過表達后，髓核細胞中的P53蛋白及其靶基因MDM2和P21的表達水平明顯增加。P53過表達能顯著降低AGGRECAN、COLLAGENII蛋白和MRNA水平。阻斷JNK通路，抑制了P53的表達，髓核細胞的相關功能因子則明顯增加。結論SYNDECAN4可以激活JNK信號通路，進而激活下游的P53信號通路，促進髓核細胞的退變。抑制JNK信號通路的活性，下調P53的表達，可以緩解髓核細胞的退變。第四部分SYNDECAN4在兔椎間盤退變模型中的作用目的建立一個兔椎間盤退變模型，探討SYNDECAN4在椎間盤退變中的作用，及可能存在的相關機制。方法選取正常體重成年新西蘭大白兔，使用18G套管針造模，造模成功后，分別注入SYNDECAN4SIRNA，CONTROLSIRNA及生理鹽水。8周后處死實驗動物，進行MRI，組織學檢查及免疫組化分析。結果退變椎間盤內注射SYNDECAN4SIRNA后，MRI檢測顯示椎間盤信號強度改善，明顯好于對照組（P結論椎間盤內注射SYNDECAN4SIRNA能延緩其退變，其機制主要是通過抑制SYNDECAN4的生成，抑制JNKP53途徑而實現的。

簡介：SOOCHOWUNIVERSITY碩士學位論文RRNMMT囉TLL論文題目納米粒子負載的阿霉素對MCF7乳腺癌細胞的靶向殺傷及生物學意義研究生姓名_____________周春艷___________指導教師姓名_________王雪峰謝芳專業(yè)名稱_____________免疫學___________研究方向腫瘤免疫論文提交日期2015年4月本人完全了解蘇州大學關于收集、保存和使用學位論文的規(guī)定，即學位論文著作權歸屬蘇州大學。本學位論文電子文檔的內容和紙質論文的內容相一致蘇州大學有權向國家圖書館、中國社科院文獻信息情報中心、中國科學技術信I研究所（含萬方數據電子出版社、中國學術期刊（光盤版）電子雜志社送交本學位論文的復印件和電子文檔，允許論文被查閱和借閱，可以采用影印、縮印或其他復制手段保存和匯編學位論文，可以將學位論文的全部或部分內容編入有關數據庫進行檢索。蘇州大學學位論文使用授權聲明涉密論文口本學位論文屬在______年月解密后適用本規(guī)定。論文作者簽名氣備衫B期舶RFB導師簽名日導師簽名

簡介：第一部分基于ITRAQ2DLCMSMS技術篩選與鑒定肺結核病血清蛋白生物學標志物研究背景結核?。═UBERCULOSIS，TB）是由結核分枝桿菌（MYCOBACTERIUMTUBERCULOSIS，MTB）引起的一種嚴重危害人類健康的慢性呼吸道傳染病，以肺結核病最為常見。結核分枝桿菌的致病性與細菌增殖引起的炎癥反應、以及機體產生遲發(fā)型變態(tài)反應損傷相關。盡管直接觀察與短程治療DOTS戰(zhàn)略的擴展及大量資金的投入，提高了治療完成率，但疾病的診斷仍然是全球結核病控制的主要障礙，結核病仍是發(fā)病率和死亡率最高的感染性疾病之一。疾病的早期診斷和及時治療對結核病的有效控制至關重要，是控制傳染源，遏制結核病流行的最重要措施。延誤診斷則導致疾病加重，增大死亡的風險，促進結核病的傳播。目前臨床上肺結核病的診斷方法有多種，但是鮮有改善結核病診斷的新技術，使得結核病診斷方法陳舊。機體感染結核分枝桿菌后，通過固有免疫和獲得性免疫抵御病原菌，在相互作用過程中可能會引起宿主機體的病理生理改變，可以通過檢測這種變化，尋找肺結核病的早期診斷方法。血清具有易獲得、非侵入性、對疾病的反應快速等優(yōu)點，是疾病生物學標志物的理想來源。本課題將應用ITRAQ標記結合2DLCMSMS技術篩選肺結核病與健康對照及肺部其他疾病血清中的差異表達蛋白，進一步應用ELISA方法驗證差異表達蛋白，通過受試者工作曲線ROC分析潛在生物學標志物的準確性、靈敏性和特異性，為肺結核病的臨床診斷提供有意義的實驗數據。研究方法本研究收集血清樣本共160例，其中肺結核病組40例，健康對照組40例，鑒別診斷組（肺炎組40例，肺癌組40例）。應用ITRAQ2DLCMSMS技術分析肺結核病與健康對照及肺部其他疾病血清中的蛋白，并通過PROTEINPILOT軟件鑒定與定量差異表達蛋白。應用生物信息學分析顯著差異表達蛋白的細胞成分、分子功能和生物過程。應用ELISA方法驗證差異表達的血清蛋白。應用受試者工作曲線對各個蛋白診斷肺結核病的靈敏性、特異性和準確性進行比較和分析。研究結果本研究應用ITRAQ2DLCMSMS技術檢測肺結核組與健康對照組及肺部其他疾病血清中的差異表達蛋白。在肺結核病血清中，共鑒定了434個蛋白質，篩選出34個蛋白（包括24個蛋白上調表達和10個蛋白下調表達）。經ELISA分析發(fā)現有3個顯著差異表達的蛋白，即蛋白S100A9S100A9、胞外超氧化物歧化酶SOD3和基質金屬蛋白酶9MMP9。相關分析發(fā)現肺結核組中MMP9的血清濃度分別與SOD3R0581、S100A9R0471中度相關，SOD3與S100A9弱相關R0287。應用受試者工作曲線分析，S100A9、SOD3和MMP9組合鑒別肺結核病與健康對照的靈敏性和特異性為925％和95％，鑒別肺結核病與肺炎的靈敏性和特異性為90％和875％，鑒別肺結核病與肺癌的靈敏性和特異性為85％和925％。結論1建立ITRAQ2DLCMSMS結合ELISA檢測技術的肺結核病血清蛋白檢測技術平臺2篩選出了3個顯著差異表達的蛋白，即S100A9、SOD3和MMP9。S100A9、SOD3和MMP9組合鑒別肺結核與健康對照組及肺部其他疾病的靈敏性和特異性為85％和875％及以上，可以作為肺結核病的潛在生物學標志物，為肺結核病的臨床診斷提供了實驗依據。3篩選的其他顯著差異的蛋白，如SUSHINIDOGENEGFLIKEDOMAINCONTAININGPROTEIN1SNED1、LLACTATEDEHYDROGENASEACHAINLDHA、FILAMINAFLNA和COSTARSFAMILYPROTEINC6F115ABRAC1等由于研究背景、材料及商品化試劑盒的限制在本研究中沒有被驗證。對于這些蛋白的進一步研究可以幫助我們找到更多有效的肺結核病診斷標志物。第二部分FCN2基因單核苷酸多態(tài)性與肺結核病易感性的關聯(lián)性研究研究背景全球有三分之一的人群曾感染過結核分枝桿菌，約有5％10％的人群最終發(fā)展成為活動性肺結核。本實驗室以往的研究發(fā)現，基因單核苷酸多態(tài)性SNPS與結核病易感性存在相關性，提示遺傳因素可能會影響個體對結核病的易感性。凝集素途徑是補體激活的一個重要途徑，在機體抵御病原菌感染過程中發(fā)揮重要作用。FICOLIN2凝集素是先天性免疫模式識別分子，能識別并結合多種病原菌，通過MBL相關絲氨酸蛋白酶如MASP2激活補體途徑，在病原菌表面標記C3B，促進巨噬細胞吞噬病原菌，形成膜攻擊復合體并破壞其細胞膜，直接消滅病原菌。目前還沒有FCN2基因SNPS與肺結核病相關性的研究。本研究將進一步探索FCN2基因啟動子區(qū)和外顯子8區(qū)的7個SNPS位點與中國漢族人群肺結核病的相關性，為預防和控制肺結核病提供新的思路。研究方法應用PCR擴增和DNA測序技術，采用病例對照方法，對中國漢族人群282例肺結核組和254例健康對照組血樣的FCN2基因啟動子區(qū)（986G＞A、602G＞A、557A＞G、64A＞C和4A＞G）和外顯子8區(qū)（6359C＞T和6424G＞T）的7個SNPS位點基因型及等位基因頻率分布進行檢測。應用邏輯回歸方法，在五種不同的遺傳模式下（共顯性、顯性、隱性、超顯性和加性）分析單個SNP與結核病的相關性。應用SNPSTATS及HAPLOVIEW42軟件對7個位點進行連鎖不平衡分析。研究結果研究發(fā)現FCN2基因7個SNPS位點的等位基因在肺結核組與健康對照組之間的分布頻率沒有顯著性差異。然而，變異純合基因型P0037，557A＞GP0038，64A＞CP0024，6424G＞T在肺結核病組的分布頻率低于健康組，在兩組之間存在顯著性差異。經年齡和性別校正后，557A＞GP001902495％CI00708964A＞CP001902495％CI007089和6424G＞TP001202395％CI，006082位點在隱性模式下與肺結核病存在顯著相關性。另外，64A＞CP0047和6424G＞TP003在共顯性模式下與肺結核病也存在顯著相關性。連鎖不平衡分析發(fā)現，除602G＞A位點以外，其余6個位點之間均存在強連鎖關系D＞075，P＜00001。另外，構建的單體型與肺結核病均不存在顯著相關性。因此FCN2基因的557A＞G、64A＞C和6424G＞T位點與肺結核病存在相關性，可能為肺結核病的保護性因素。結論1采用病例對照方法及統(tǒng)計學分析，首次對FCN2基因啟動子區(qū)及外顯子區(qū)8的7個SNPS位點與肺結核病的易感性進行關聯(lián)研究。2FCN2基因的557A＞G、64A＞C和6424G＞T位點的變異純合型可能為肺結核病的保護性因素，在隱性模式下與肺結核病顯著相關。64A＞C和6424G＞T位點在共顯性模式下也與肺結核病顯著相關。3FCN2基因的986G＞A、602G＞A、4A＞G和6359C＞T的SNPS與中國南方漢族人群肺結核病均不存在顯著的相關性。

簡介：目的本實驗研究主要探討當歸多糖（ANGELICASINENSISPOLYSACIDEASP）在體外對人外周血來源的細胞因子誘導的殺傷（CYTOKINEINDUCEDKILLERCIK）細胞在增殖能力、免疫表型、所分泌的細胞因子及其對K562細胞殺傷活性等方面的影響，并初步探討其可能的機制。方法采集健康志愿者外周血，用密度梯度離心法分離出外周血單個核細胞PERIPHERALBLOODMONONUCLEARCELL，PBMC，第0D加入IFNΓ1000IUML，24H后再加入IL21000IUML、抗CD3單抗50NGML繼續(xù)培養(yǎng)，此后每隔3D根據添加不同濃度的ASP分為5組A組（不加ASP）、B～E組（分別加ASP125、25、50、100ΜGML）。各組均置于37℃、5％CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，定期觀察細胞形態(tài)變化，根據細胞生長情況適時進行傳代培養(yǎng)。全自動血細胞計數儀計數不同時間各組CIK細胞的絕對數目，計算增殖倍數，并繪制細胞增殖曲線，評估細胞增值情況；流式細胞術檢測各組CIK細胞中CD3CD4、CD3CD8、CD3CD56細胞的百分比；酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測各組CIK細胞細胞上清液中IL2、IFNΓ及TNFΑ的表達；CCK8法檢測各組CIK細胞對K562細胞的殺傷活性；ANNEXINVFITCPI染色，流式細胞術檢測培養(yǎng)第13DCIK細胞的凋亡率；最后檢測CIK細胞在培養(yǎng)至13D的細胞周期變化。結果PBMCS體外經多種細胞因子誘導培養(yǎng)后得到大量擴增的CIK細胞。不同檢測點各組細胞活率都保持在90以上；其中培養(yǎng)第16天后E組（100ΜGASP組）CIK細胞的增殖倍數為（14246±945）倍，明顯高于對照組CIK細胞（10953±827）倍（P005），而D組、E組CIK細胞中CD3CD56細胞亞群比例在培養(yǎng)第16D時分別為（2665±371）、（2836±428）與對照組（2075±356）相比存在差異（P結論隨著培養(yǎng)時間的延長，中、高濃度的ASP對CIK細胞的增殖有一定的促進作用；中、高濃度的ASP能夠促進CIK細胞上清液中TNFΑ、IFNΓ、IL2等細胞因子的表達水平；此外ASP能夠增加CIK細胞中的主要效應細胞CD3CD56細胞亞群的比例，但對CD3CD4、CD3CD8細胞亞群的比例變化影響不大。用ASP誘導培養(yǎng)的CIK細胞對K562細胞有較強的殺傷效應。ASP促進CIK細胞的增殖可能與其促進CIK細胞表面表達IL2R有關，同時ASP還可通過減少活化CIK細胞的凋亡及促進CIK細胞快速進入S期等方面提高CIK細胞的整體增殖速度。

簡介：背景當今社會周圍神經損傷的發(fā)生率特別高，對于缺損長度超過2CM的損傷目前尚無理想的解決辦法，近些年生物工程學的發(fā)展和干細胞研究深入開展給神經損傷的治療帶來新希望。種子細胞即許旺細胞一直是研究的“瓶頸”，自體及異體的許旺細胞因其自身的缺點未能得到大規(guī)模使用，由干細胞體外誘導而來的類許旺細胞具有廣闊的應用前景，如何證明所誘導的類許旺細胞具有許旺細胞的功能至關重要，許旺細胞具有強大的自分泌和旁分泌功能，這可能是其發(fā)揮生物學效應的機制之一，因此如能證明所誘導的類許旺細胞可以分泌真正許旺細胞分泌的一些功能性蛋白，則可以為后期的進一步研究提供實驗理論依據。目的分別收集人臍血間充質干細胞、由干細胞誘導分化而來的類許旺細胞以及人引產胎兒來源的許旺細胞的細胞培養(yǎng)上清液，提取其中的蛋白，運用雙向電泳技術比較三種細胞的分泌蛋白差異性及相似性，查詢相關蛋白的主要功能。方法按照本課題組之前使用的先用羥乙基淀粉沉淀紅細胞，再運用人淋巴細胞分離液離心提取原代間充質干細胞，通過形態(tài)學和流式細胞儀測定細胞表面標志物等方法鑒定和測定其純度，符合要求者進行下一步實驗，取第三代干細胞采用本課題組之前優(yōu)化的誘導方法進行體外人工誘導。采用酶消化法制備人許旺細胞。對三種細胞（間充質干細胞，類許旺細胞，許旺細胞）采用“逐步過度法”過度到無血清培養(yǎng)，收集三種細胞培養(yǎng)上清液，用022UM濾器過濾去除殘留細胞，加入1MM濃度的蛋白酶抑制劑后放入超低溫冰箱（80℃）備用。提取培養(yǎng)液里的分泌蛋白，運用雙向電泳和質譜分析技術尋找差異顯著蛋白，對間充質干細胞比許旺細胞少的蛋白和類許旺細胞比間充質干細胞多的蛋白進行匹配，查詢其蛋白的主要功能。結果12D凝膠電泳圖具有較好的分辨率及重復性，平均每張膠的蛋白表達點有三千左右，匹配率各自是96％、97、98。2誘導前的HUCBMSCS與SCS有397個蛋白差異點，誘導后的類SCS與SCS僅有280個差異蛋白點，說明間充質干細胞誘導為類許旺細胞后在分泌蛋白組學方面更相似于許旺細胞。3對于按照篩選標準篩選出的12個差異蛋白進行質譜鑒定，最終鑒定出7個蛋白。（剩下五個因蛋白濃度較低無法成功鑒定出來）4鑒定出的上述分泌蛋白經查文獻得知大部分對神經損傷的修復具有一定的促進作用。結論1使用羥乙基淀粉和人淋巴細胞分離液可提取原代的間充質干細胞。2人臍血間充質干細胞誘導后在分泌蛋白方面更接近真正的許旺細胞。3本實驗成功鑒定出間充質干細胞在誘導分化為類許旺細胞的過程中增加的7個分泌蛋白點，且這些分泌蛋白也是許旺細胞所分泌的。這些分泌蛋白進一步證明了所誘導的類許旺細胞和正常的許旺細胞在分泌蛋白組學方面具有一定的相似性，但同時還存在一定的差距，誘導方案還需要進一步完善。

簡介：學校代碼；10004／LYL／II3U113L／／10111118ILLL3L113IL1LU／Y3308331BEIJINGJIAOTONGUNIVERSITY碩士學位論文ALL42誘導線粒體自噬及其生物學效應研究作者姓名學科專業(yè)指導教師培養(yǎng)院系溫杰生物化學與分子生物學張瑩副教授理學院二零一七年六月學位論文版權使用授權書本學位論文作者完全了解北京交通大學有關保留、使用學位論文的規(guī)定。特授權北京交通大學可以將學位論文的全部或部分內容編入有關數據庫進行檢索，并采用影印、縮印或掃描等復制手段保存、匯編以供查閱和借閱。同意學校向國家有關部門或機構送交論文的復印件和磁盤。保密的學位論文在解密后適用本授權說明學位論文作者簽名肚簽字日期弘卞伽6日一導師簽名一簽字日期2。F陣6月。6目一

簡介：點擊查看更多銀屑病皮損間充質干細胞的生物學特性及其對HaCaT細胞凋亡影響的研究.pdf精彩內容。

簡介：目的探討采用LCU錐形股骨柄假體行生物學固定型全髖關節(jié)置換術THA的早期療效，為全髖關節(jié)置換術的假體選擇提供臨床依據。方法回顧性分析2011年8月至2013年4月我科采用LCU錐形股骨柄假體行全髖關節(jié)置換術病例的療效。共85例90髖，男26例28髖，女59例62髖；年齡19～83歲，平均55歲，平均體重指數（2333±313）KG／㎡。單髖80例，雙髖5例。術前診斷發(fā)育不良繼發(fā)骨關節(jié)炎者34例（38髖），原發(fā)性骨關節(jié)炎18例19髖，股骨頭壞死17例17髖，股骨頸骨折14例14髖，類風濕性關節(jié)炎1例1髖，陳舊性結核1例（1髖）。股骨側假體均采用LCU錐形股骨柄假體行生物學固定。髖臼采用陶瓷陶瓷界面者78髖，陶瓷聚乙烯界面者12髖。對手術前、后患側髖關節(jié)的功能進行比較研究，采用HARRIS評分標準評定髖關節(jié)功能，并對各個隨訪期的影像學資料進行分析。結果82例87髖患者術后獲得隨訪，平均19個月平均12～32個月，3例失訪。術前髖關節(jié)功能HARRIS評分為（3373±321）分，末次隨訪時髖關節(jié)功能HARRIS評分改善至（9284±447）分，與術前比較差異有統(tǒng)計學意義（T24269，P結論采用LCU股骨柄假體行生物學固定型全髖關節(jié)置換術可獲得理想的初始穩(wěn)定和滿意的早期療效。

簡介：目的課題組前期研究發(fā)現傷寒沙門菌SUFC及T4606基因的表達受兩個重要的調節(jié)因子RPOE和RPOS的雙重調控，推測其可能在傷寒沙門菌致病過程中發(fā)揮重要作用。SUFC在其他腸道致病菌中對鐵離子的轉運至關重要，參與細菌對抗宿主細胞的氧化應激；傷寒沙門菌T4606基因編碼一未知功能的蛋白質，對其基因序列分析發(fā)現具有PATATINLIKEPHOSPHOLIPASE的功能基序，本研究旨在對SUFC基因及T4606基因在傷寒沙門菌中的功能進行鑒定，揭示兩者在傷寒沙門菌致病過程中的作用。方法一、傷寒沙門菌SUFC功能研究1SUFC基因缺陷變異株的制備用特異性引物擴增帶有SUFC基因上下游同源臂的卡那霉素抗性基因片段將其電轉至含PKD46的傷寒沙門菌野生株，利用ΛRED系統(tǒng)制備SUFC的基因缺陷株。2SUFC基因缺陷回補株的制備構建重組質粒PACYC184SUFC，將其及PACYC184空質粒導入SUFC基因缺陷株，制備SUFC基因的缺陷回補株及空質?；匮a對照株。3生長曲線的測定分別測定STYPHI野生株、SUFC基因缺陷株、SUFC基因缺陷回補株和空質?；匮a對照株在正常條件、高滲應激、酸和氧應激條件下的生長曲線，比較各菌株的生長差異。4SUFC基因缺陷株的上皮細胞侵襲實驗將傷寒沙門菌野生株、SUFC基因缺陷變異株及其回補株和空質?；匮a對照株培養(yǎng)至對數生長期（OD60004），分別感染HELA細胞（MOI均為10），分析各菌株對上皮細胞侵襲力的差異。5SUFC基因缺陷株在巨噬細胞內的生存實驗將傷寒沙門菌野生株、SUFC基因缺陷變異株及其回補株和空質?；匮a對照株培養(yǎng)至對數生長期（OD60004），分別感染THP1巨噬細胞（MOI均為10），比較各菌株在巨噬細胞內的生存能力差異，同時在細菌感染巨噬細胞的不同時間點測定上清液中巨噬細胞相關細胞因子的表達水平。二、傷寒沙門菌T4606基因功能研究1T4606基因缺陷變異株的制備構建T4606基因缺損型同源核苷酸片段，采用自殺質粒PGMB151介導的同源重組方法制備傷寒沙門菌T4606缺陷變異株。2T4606基因缺陷回補株的制備構建重組質粒PBADT4606，將其及空質粒PBAD分別導入T4606基因缺陷變異株，制備SUFC基因缺陷回補株和空質?；匮a對照株。3生長曲線測定測定STYPHI野生株、T4606基因缺陷株、T4606基因缺陷回補株、空質?；匮a對照株在普通條件、高滲應激、酸應激和氧應激條件下的生長曲線，比較各菌株的生長差異。4T4606基因缺陷株的上皮細胞侵襲實驗方法同上述傷寒沙門菌T4606基因缺陷株的上皮細胞侵襲實驗。5T4606基因缺陷株在巨噬細胞內生存實驗，方法同上述傷寒沙門菌T4606基因缺陷株的胞內生存實驗。結果1經PCR及序列分析驗證，成功制備了傷寒沙門菌SUFC、T4606基因缺陷株及其回補株和空質粒回補對照株。2生長曲線表明，SUFC缺陷株在普通條件和高滲應激條件下與野生株的生存能力無明顯差異，而在氧應激條件下，SUFC缺陷株的生長明顯遲緩于野生株，回補SUFC基因至SUFC缺陷株后，回補株的生長恢復至野生株水平。3與野生株相比，SUFC缺陷株對上皮細胞的侵襲力明顯減弱。4與野生株相比，SUFC缺陷株在巨噬細胞內的生存能力明顯減弱；野生株與SUFC缺陷株感染巨噬細胞后，細胞培養(yǎng)上清中均有細胞因子TNF和IL6的表達，但在SUFC缺陷株中TNF和IL6的表達水平均明顯低于野生株。5在普通生長條件和氧應激條件下，T4606的缺失對傷寒沙門菌的生長無影響，但在高滲應激條件下，T4606缺陷株的生長明顯遲緩于野生株，回補T4606基因至T4606缺陷株后，回補株的生長恢復至野生株水平。6與野生株相比，T4606缺陷株在巨噬細胞內的生存能力及其對HELA細胞的侵襲力無明顯差異。結論通過兩種細菌基因缺失制備系統(tǒng)，我們成功制備了傷寒沙門菌SUFC和T4606基因缺陷株及其回補株和空質粒回補對照株。本研究表明，SUFC基因有助于傷寒沙門菌在氧應激環(huán)境下的生長，促進傷寒沙門菌在巨噬細胞內的存活，且明顯增強傷寒沙門菌對上皮細胞的侵襲力，提示SUFC基因對于傷寒沙門菌在致病過程中的侵襲和胞內生存兩個關鍵環(huán)節(jié)具有重要的促進作用。同時，T4606基因促進傷寒沙門菌在高滲應激環(huán)境下的生長，而對傷寒沙門菌的侵襲力及在巨噬細胞內的存活能力無明顯影響，說明T4606基因可能在傷寒沙門菌感染過程中主要發(fā)揮抵抗腸道高滲環(huán)境的作用。

簡介：細胞基礎療法為尿道組織重建提供了有前景的選擇。有研究發(fā)現人尿液中存在著一種干細胞，后被定義為尿源性干細胞USCS，這種干細胞具有較強的增殖能力，遺傳穩(wěn)定性好，并可有效分化為尿路上皮細胞和平滑肌細胞，且尿源性干細胞的獲取簡便、無創(chuàng)、成本低廉，這些優(yōu)點為尿路的組織工程重建提供了理想的種子細胞。在相關的研究中，發(fā)現USCS能促進無胸腺裸鼠腎臟、陰莖海綿體及尿道括約肌等組織的再生。然而，因小鼠體型過小，并不適宜作為尿道重建研究的動物模型。通過查閱文獻發(fā)現，新西蘭大白兔是研究尿道重建的常用動物模型。為避免因異種細胞移植引起排斥反應的發(fā)生，因此有必要采用自體干細胞進行尿道組織重建研究。然而兔尿液中是否存在干細胞，且能否進行分離后培養(yǎng)，目前還沒有相應的研究報告。目的證實兔尿液中存在尿源性干細胞RABBITURINEDERIVEDSTEMCELLS，RUSCS，并誘導其分化為尿路上皮細胞及平滑肌細胞，為后續(xù)下尿路組織重建的研究提供種子細胞。方法通過采用F8雙腔導尿管導尿術收集6只成年雄性新西蘭大白兔（體重介于20～25KG）尿液。采用離心分離法分離尿源性干細胞，經貼壁篩選法純化細胞，KSFM和EFM混合培養(yǎng)基外體培養(yǎng)擴增。光鏡下觀察細胞形態(tài)繪制細胞生長曲線測定細胞增殖情況流式細胞術鑒定細胞免疫表型并誘導其向尿路上皮細胞和平滑肌細胞分化。結果從14份兔子尿液樣本中，成功的分離并培養(yǎng)出尿源性干細胞，每30ML兔子尿液中約有1～2個細胞克隆，在形態(tài)上RUSCS呈“米粒狀”。RUSCS的細胞倍增數量PD和平均倍增時間DT分別是485±62和（257±84）H單個RUSC克隆在516±05天內可增殖至41014個細胞24853981014細胞生長曲線呈正常的細胞增殖模型“S”型流式細胞檢測顯示，RUSCS在P3時CD29，CD90和CD105呈陽性表達，而CD31、CD34和CD45表達呈陰性當誘導表皮生長因子EGF加入培養(yǎng)基培養(yǎng)，RUSCS可誘導分化為“鵝卵石”樣的細胞，特異性表達上皮細胞蛋白，如AE1AE3當誘導平滑肌分化的生長因子TGFΒ1和PDGFBB加入培養(yǎng)基培養(yǎng)時，RUSCS分化為“紡錘狀”樣的細胞，表達平滑肌特異蛋白，如ΑSMA、DESMIN和MYOSIN。結論根據課題組初步的實驗數據分析顯示，兔尿液中存在USCS，且易于在體外分離和培養(yǎng)，并擁具有很強的增殖能力，能夠被誘導分化為尿路上皮細胞和平滑肌細胞。因此，RUSCS在兔子模型中，可以作為一種潛在的自體干細胞來源，用于尿道缺損的重建和膀胱功能的修復。

簡介：目的肺間充質干細胞為肺間充質來源的內源性成體干細胞，能夠自我復制并分化成肺組織中的各種間充質及非間充質細胞，參與肺損傷的修復過程，是急性肺損傷及各種肺部疾病治療的潛在靶點。全氟化碳為肺液體通氣治療的主要介質，具有高攜氧性及生物抗炎效應，但其治療急性肺損傷的機制仍不明確，本研究擬從全氟化碳對肺間充質干細胞生物學特性的影響方面探討全氟化碳治療急性肺損傷的作用機制。方法1采用膠原蛋白酶消化法從大鼠肺臟中提取LMSC，并對所提取細胞的表面標志抗原及體外誘導分化能力進行鑒定。2將細胞分為LMSC組和PFC處理組，分別繪制兩組生長曲線并檢測細胞周期以觀察PFC對LMSC體外生長增殖的影響。3將細胞分為對照組、SAGM誘導分化組和SAGMPFC組，誘導LMSC向肺上皮細胞分化，分別采用RTQPCR及免疫熒光檢測SPC和AQP5的MRNA和蛋白表達，觀察PFC對LMSC向肺泡上皮分化能力的影響。4將細胞分為對照組、LPS200NGML組、PFC組以及LPS200NGMLPFC組，分別干預24H后，采用RTQPCR檢測細胞IL1RA、KGF、VEGF、HGF、TSG6、ANG1和TGFΒ的MRNA表達，采用ELISA法檢測細胞培養(yǎng)上清液中HGF的分泌量，以觀察PFC對LMSC旁分泌能力的影響。結果1從大鼠肺臟組織中提取的細胞體外培養(yǎng)貼壁，免疫表型為CD29CD54CD90CD45CD11BCD31，能夠誘導向成脂、成骨和成軟骨方向分化，可以鑒定為LMSC。2LMSC的生長曲線及細胞周期檢測均符合干細胞特點，PFC組生長曲線及細胞周期均較LMSC組無明顯差異。3誘導分化組及PFC組均可見SPC和AQP5表達，對照組免疫熒光基本無SPC和AQP5表達。前兩組SPC和AQP5的平均光密度值及MRNA相對表達量均顯著高于對照組。誘導分化組SPC平均光密度值及MRNA相對表達量均高于PFC組，但兩組之間AQP5的平均光密度值及MRNA相對表達量無統(tǒng)計學差異。4LPS組IL1RA、KGF、VEGF和TSG6MRNA表達高于對照組。LPSPFC組IL1RA、KGF及VEGFMRNA表達高于LPS組。細胞培養(yǎng)上清中LPS組HGF含量明顯高于對照組，LPSPFC組則高于LPS組。PFC組和對照組之間所有旁分泌因子表達均無差異。結論1利用膠原酶消化法能成功提取LMSC。2PFC不影響LMSC體外生長增殖。3PFC抑制LMSC向Ⅱ型上皮細胞分化，不影響LMSC向Ⅰ型上皮細胞分化。4LPS能刺激LMSC分泌IL1RA、KGF、VEGF、HGF和TSG。PFC能促進受LPS刺激的LMSC分泌IL1RA、KGF、VEGF及HGF，對未受LPS刺激的LMSC則無促進作用。

簡介：電子科技大學UNIVERSITYOFELECTRONICSCIENCETECHNOLOGYOFCHINA碩士學位論文MASTERTHESIS論文題目CAVEOLAECAVEOLIN1在低切應力切應力引發(fā)乳腺癌引發(fā)乳腺癌細胞轉移細胞轉移的力學生物學機制研究的力學生物學機制研究學科專業(yè)生物化學生物化學與分子生物學與分子生物學學號201221090308作者姓名官劉員官劉員指導教師劉貽堯劉貽堯教授THEMECHANOBIOLOGICALMECHANISMSOFCAVEOLAECAVEOLIN1INLOWSHEARSTRESSINDUCEDBREASTCARCINOMACELLMIGRATIONINVASIONAMASTERTHESISSUBMITTEDTOUNIVERSITYOFELECTRONICSCIENCETECHNOLOGYOFCHINAMAJBIOCHEMISTRYMOLECULARBIOLOGYAUTHLIUYUANGUANADVISPROFYIYAOLIUSCHOOLSCHOOLOFLIFESCIENCETECHNOLOGY

簡介：I碩士學位論文論文題目鼠抗人B7H4受體單克隆抗體的研制及其生物學功能的初步研究研究生姓名張標指導教師姓名顧宗江專業(yè)名稱免疫學研究方向腫瘤免疫論文提交日期2015年5月1