建立兔椎間盤器官體外培養(yǎng)系統(tǒng)觀察髓核組織和細胞的生物學(xué)特性.pdf

1、目的:體外培養(yǎng)兔整體椎間盤器官包括上下椎體骨質(zhì)、上下軟骨終板、纖維環(huán)及髓核組織，觀察髓核組織和細胞生物學(xué)特性，探索體外培養(yǎng)椎間盤器官建立椎間盤退行性變模型的可行性。
　　 方法:分離兔帶骨質(zhì)軟骨終板的椎間盤器官，采用等滲透壓培養(yǎng)基培養(yǎng)。觀察組織膨脹程度、在0d(新鮮)、7d、14d用組織切片HE染色觀察組織結(jié)構(gòu)、透射電鏡觀測髓核細胞核、CCK-8試劑盒檢測髓核細胞活性、TUNEL檢測髓核細胞凋亡、RT-PCR技術(shù)檢測髓核組織聚集

2、蛋白聚糖及Ⅱ型膠原mRNA的表達情況。
　　 結(jié)果:1、培養(yǎng)72h后，組織膨脹趨于穩(wěn)定，組織重量增加約為18.0％，培養(yǎng)1-4h間，組織膨脹速度最快，隨后68小時，緩慢連續(xù)增加;2、培養(yǎng)14d后，椎間盤大體結(jié)構(gòu)仍得以維持，椎間盤解剖結(jié)構(gòu)清楚。14d時，髓核細胞外基質(zhì)降解較7d明顯，髓核數(shù)量細胞明顯較7d減少，從0d-14d表現(xiàn)為漸進退變過程;3、CCK-8試劑盒檢測發(fā)現(xiàn)7d時髓核細胞活性率為54％±9％，14d為22％±5％，7

3、d與14d細胞活性比較有統(tǒng)計學(xué)差異（P＜0.05）;4、透射電鏡發(fā)現(xiàn):14d時，髓核細胞核較7d時明顯皺縮，細胞基質(zhì)降解亦明顯，提示細胞凋亡;5、TUNEL凋亡檢測發(fā)現(xiàn):14d髓核細胞凋亡率為44.97％±16.45％較新鮮髓核細胞5.71％±6.52％增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）;6、RT-PCR檢測發(fā)現(xiàn):蛋白聚糖與Ⅱ型膠原mRNA表達均隨培養(yǎng)時間增加而表達下降，下降均有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05)。
　　 結(jié)論:體外