PRRSV GP4、GP5基因的克隆及原核表達(dá).pdf

1、豬繁殖與呼吸綜合征是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒引起的豬的一種烈性傳染病，主要以妊娠母豬發(fā)生早產(chǎn)、流產(chǎn)、死胎、大型木乃伊胎、產(chǎn)弱仔及仔豬的呼吸道疾病為特征。
　　本試驗(yàn)進(jìn)行了白城地區(qū)高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒的分離鑒定，從疑似患豬繁殖與呼吸綜合征病豬的肺組織中分離出一株能引起 MARC-145細(xì)胞典型病變的病毒，經(jīng)RT-PCR、理化特性鑒定、血清學(xué)試驗(yàn)、電鏡觀察等方法鑒定，該分離毒株為豬繁殖與呼吸綜合征病毒，命名為BC株。

2、　　參考GeneBank中豬繁殖與呼吸綜合征病毒基因序列，設(shè)計(jì)2對(duì)特異性引物，對(duì)BC株GP4、GP5二種主要結(jié)構(gòu)蛋白基因進(jìn)行了RT-PCR擴(kuò)增。測(cè)序結(jié)果表明，BC株GP4蛋白基因全長(zhǎng)537bp、編碼179個(gè)氨基酸；GP5蛋白基因全長(zhǎng)603bp、編碼200個(gè)氨基酸。分別將BC株GP4、GP5基因克隆至原核表達(dá)載體，并獲得成功表達(dá)。經(jīng)Western blot免疫印跡檢測(cè)，表達(dá)蛋白的分子量約為35kDa和25kDa，該產(chǎn)物可與PRRSV陽(yáng)性血