EGCG經(jīng)PI3K-Akt信號(hào)通路誘導(dǎo)人胃癌BGC-823細(xì)胞G1期阻滯.pdf

1、目的:探討表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯(Epigallocatechin-3-gallate,EGCG)通過(guò)PI3K-Akt通路對(duì)人胃癌BGC-823細(xì)胞周期調(diào)控的分子機(jī)制。
　　方法:采用MTT比色法檢測(cè)EGCG對(duì)BGC-823細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用;平皿克隆觀察EGCG處理前后BGC-823細(xì)胞錨定生長(zhǎng)能力的改變;PI染色流式細(xì)胞術(shù)分析EGCG對(duì)BGC-823細(xì)胞周期分布的影響;免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測(cè)EGCG處理后BGC-823細(xì)胞中Ak

2、t、pAkt蛋白表達(dá)的改變,Western blot研究EGCG對(duì)通路相關(guān)蛋白Akt、pAkt、cyclinD1、PCNA表達(dá)的影響。
　　結(jié)果:MTT檢測(cè)證明EGCG.對(duì)BGC-823細(xì)胞生長(zhǎng)有顯著抑制作用,呈濃度和時(shí)間依賴性。平皿克隆形成實(shí)驗(yàn)顯示EGCG(25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml)作用BGC-823細(xì)胞5d后克隆形成數(shù)目逐漸減少,說(shuō)明EGCG能夠以濃度依賴方式抑制BGC-823細(xì)胞的錨定生長(zhǎng)能力。PI流

3、式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)表明,胰島素樣生長(zhǎng)因子-1(IGF-1)作為PI3K-Akt激動(dòng)劑可以明顯促進(jìn)BGC-823細(xì)胞由G1期進(jìn)入S期;不同濃度EGCG(25μg/mL、50μg/mL、100μg/mL)及Akt通路阻斷劑LY29400250μmol/L分別與 IGF-1(25ng/ml)共同處理BGC-823細(xì)胞24h和同一濃度EGCG(50g/ml)加IGF-1(25ng/ml)共同處理BGC-823細(xì)胞12h、24h、48h后,結(jié)果細(xì)胞均呈

4、現(xiàn)明顯的G1期阻滯現(xiàn)象,且呈濃度和時(shí)間依賴性,其中阻斷劑組周期阻滯作用高于EGCG最高濃度組。免疫細(xì)胞化學(xué)法觀察發(fā)現(xiàn)EGCG能夠以濃度和時(shí)間依賴方式降低Akt的磷酸化表達(dá),但對(duì)總的Akt作用不明顯。Western blot研究表明IGF-1(25ng/ml)可以顯著提高Akt的磷酸化水平,但對(duì)總的Akt影響不明顯;不同濃度EGCG(25μg/mL、50μg/mL、100μg/mL)及Akt通路阻斷劑LY29400250μmol/L分別預(yù)

5、處理BGC-823細(xì)胞48 h和同一濃度EGCG(50μg/ml)分別處理BGC-823細(xì)胞12h、24h、48h后,再以IGF-1作用30min,結(jié)果發(fā)現(xiàn)通路相關(guān)蛋白pAkt、cyclinD1、PCNA表達(dá)下調(diào),且呈濃度和時(shí)間依賴性,說(shuō)明EGCG能夠通過(guò)抑制PI3K-Akt通路發(fā)揮作用。
　　結(jié)論:
　　1、EGCG對(duì)體外培養(yǎng)的人胃癌BGC-823細(xì)胞有抑制增殖的作用,呈濃度和時(shí)間依賴性。
　　2、EGCG抑制人胃癌