鐵離子(Ⅲ)螯合對雞蛋卵轉鐵蛋白構象、消化性和過敏原性的影響.pdf

1、雞蛋是FAO認定的八大類主要過敏食品之一,也是人類最重要的食物蛋白質來源之一。雞蛋蛋白的生物學價值達95,是最理想的優(yōu)質蛋白質。卵轉鐵蛋白(OVT)存在于雞蛋蛋清中,約占蛋清蛋白含量的12％,是公認的雞蛋清中的一種主要過敏原。它還容易結合溶液中的鐵離子,具有轉運鐵離子的功能,是一種鐵離子結合糖蛋白。因此,本論文通過探明卵轉鐵蛋白在螯合鐵離子過程中的結構和致敏性的變化,同時評估卵轉鐵蛋白的可消化性,旨在闡明卵轉鐵蛋白結構變化與過敏原性的的

2、關系,同時為金屬離子對卵轉鐵蛋白結構和過敏原性的影響提供依據。
　　 本論文工作首先分離純化雞蛋過敏原OVT,然后制備無鐵卵轉鐵蛋白(Apo-OVT)和卵轉鐵蛋白鐵螯合物(Holo-OVT),再將這兩種蛋白免疫動物獲得相應的多克隆抗體;針對OVT結合Fe3+和脫Fe3+的過程,檢測其構象以及潛在過敏原性的變化,并進一步通過模擬胃液(SGF)和模擬腸液(SIF)評價Apo-OVT和Holo-OVT的體外消化穩(wěn)定性。主要研究結果與結

3、論如下。
　　 1.預處理后的蛋清經陰離子交換層析和疏水層析分離,獲得了純度達95%以上的雞蛋過敏原OVT(SDS-PAGE),再采用透析和超濾的方法制備了Apo-OVT和Holo-OVT,經Urea-PAGE電泳鑒定,Apo-OVT幾乎都是以無鐵-OVT的形式存在,Holo-OVT中90%以上是以Fe2-OVT(1分子OVT螯合2分子Fe3+)的形式存在。
　　 2.分別以Apo-OVT和Holo-OVT為抗原,免疫新

4、西蘭大白兔,獲得了相應的多克隆抗體,通過間接ELISA和Western-blotting鑒定其效價和特異性。制備的抗Apo-OVT多克隆抗體效價達1:100,000;抗Holo-OVT多克隆抗體的效價高達1:200,000?？贵w特異性強,可以滿足IgG結合能力的評估。
　　 3.針對OVT結合和脫鐵的過程,在Apo-OVT的蛋白溶液中緩慢加入鐵離子以模擬結合鐵離子的過程,采用逐漸降低Holo-OVT蛋白的溶液pH以模擬脫鐵的過程

5、。通過紫外光譜、內源熒光光譜和圓二色光譜檢測蛋白構象的變化,并采用間接和競爭抑制ELISA方法檢測蛋白質過敏原性的變化。結果表明,卵轉鐵蛋白在結合鐵和脫鐵的過程中二級結構變化不明顯;隨著溶液中Fe3+濃度的慢慢增大,卵轉鐵蛋白與Fe3+逐漸結合,蛋白質的三級結構先展開,而后聚合得更緊密,與抗體IgE的結合能力增強。隨著溶液pH值的降低,卵轉鐵蛋白不斷釋放Fe3+,蛋白的三級結構慢慢展開,與IgG和IgE的結合能力減弱。
　　 4