蒜頭果蛋白誘導(dǎo)HepG-2細(xì)胞凋亡的研究.pdf

1、目的:研究蒜頭果蛋白誘導(dǎo)肝癌HepG-2細(xì)胞增殖抑制及凋亡誘導(dǎo)效應(yīng)，為蒜頭果蛋白的開發(fā)利用奠定基礎(chǔ)。
　　方法:采用蒜頭果粉碎、PBS抽提、離心、硫酸銨沉淀、疏水色譜層析從蒜頭果種仁中分離純化出蒜頭果蛋白；MTT法檢測(cè)蒜頭果蛋白不同濃度及不同時(shí)間對(duì)HepG-2細(xì)胞的增殖抑制作用；HepG-2細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察；DNA凝膠電泳分析不同作用時(shí)間蒜頭果蛋白作用HepG-2細(xì)胞后DNA條帶的斷裂；流式細(xì)胞儀檢測(cè)不同作用時(shí)間蒜頭果蛋白作用Hep

2、G-2細(xì)胞的凋亡峰；流式細(xì)胞儀檢測(cè)不同作用時(shí)間蒜頭果蛋白作用HepG-2細(xì)胞凋亡時(shí)線粒體膜電位的變化；分光光度法檢測(cè)casspase-3、8、9的活性；MTT法檢測(cè)caspase光譜抑制劑、casspase-3、8、9抑制劑對(duì)蒜頭果蛋白誘導(dǎo)HepG-2細(xì)胞的增殖抑制作用的影響。
　　結(jié)果:蒜頭果蛋白能明顯抑制HepG-2細(xì)胞的生長(zhǎng)，且呈時(shí)間劑量關(guān)系，當(dāng)作用24h、48h、72h時(shí)其IC50分別為0.2480μg/mL、0.1516

3、μg/mL、0.0739μg/mL；光學(xué)顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)細(xì)胞變圓、固縮、體積變小、細(xì)胞間隙增大、有凋亡小體的形成，熒光顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)核破碎、呈團(tuán)塊狀，熒光強(qiáng)度明顯高于對(duì)照組；24h時(shí)DNA開始出現(xiàn)明顯的降解條帶，到48h時(shí)DNA降解更為明顯但已經(jīng)沒有條帶存在；12h時(shí)線粒體膜電位開始下降，隨著給藥時(shí)間的延長(zhǎng)，線粒體膜電位越來越低；caspase-3、8、9的活性隨著給藥時(shí)間的延長(zhǎng)而增加，36h時(shí)達(dá)到最大值；加入caspase廣譜抑制劑、c

4、asspase-3、8、9抑制劑后，蒜頭果蛋白對(duì)HepG-2細(xì)胞的抑制率明顯降低。
　　結(jié)論:蒜頭果蛋白對(duì)HepG-2細(xì)胞具有明顯的時(shí)間劑量關(guān)系；形態(tài)學(xué)觀察、DNA片段化結(jié)果都表明：蒜頭果蛋白誘導(dǎo)HepG-2細(xì)胞死亡是凋亡性質(zhì)的細(xì)胞死亡；蒜頭果蛋白能夠使HepG-2細(xì)胞線粒體膜電位去極化增強(qiáng)，線粒體功能下降，從而誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡；給藥后caspase-3、8、9活性均明顯升高，36h時(shí)活性最高，加入caspase廣譜抑制劑、caspa